| 查看: 810 | 回复: 4 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
求助，急，跪谢！ 已有3人参与
|
|||
|
我准备在大肠杆菌中异源表达并纯化Methanosarcina acetivorans中的acetate kinase （基因locus number为MA3606），请问： 1）该基因稀有密码子含量如何？我该使用什么蛋白表达菌株？ 2）选择一种pET载体，使该异源表达的蛋白带上C末端的His tag。 3）设计一个纯化方法，将该蛋白纯化（注明用什么buffer，什么色谱柱，什么流速，柱与柱之间需要进行什么处理，如何检测蛋白等）。 |
回复此楼» 猜你喜欢
材料与化工考研调剂
已经有13人回复
-
一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂
已经有5人回复
-
一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线
已经有7人回复
-
275求调剂
已经有12人回复
-
材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂
已经有7人回复
-
0856材料化工调剂 总分330
已经有4人回复
-
308求调剂
已经有6人回复
-
一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂
已经有5人回复
-
0856材料专硕353求调剂
已经有8人回复
-
南昌大学材料专硕311分求调剂
已经有9人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助，化合物名称，急用
已经有2人回复
- 急！！！！！！！！！！！求助剥落试验腐蚀等级评定（铝合金搅拌摩擦焊焊接接头）
已经有2人回复
- 急！求化合物CAS号，跪谢！！！(4-十二烷基吡啶，4-十四烷基吡啶，4-十六烷基吡啶，4-
已经有4人回复
- 高分求助空心球不闭合原因，急等
已经有10人回复
- 求助一篇文献，各位亲帮忙，急用！！！！
已经有0人回复
- 印染助剂资源求助，哪位大神帮忙一下，急！
已经有3人回复
- 如何分离二氯甲烷，三乙胺，水，杂质？求其具体的分离工艺！跪求！先谢过了！急！
已经有5人回复
- 【求助】急！！！！求助各位大神关于动脉用药与静脉用药的几个问题！！！！跪谢！
已经有0人回复
- 急！ 求助 SPSS 线性回归得到的系数带入公式计算的结果与SPSS中预测值不一致!!!!
已经有6人回复
- AspenONEV8-2安装总是失败，求助，急！
已经有4人回复
- 求助合成酰胺的问题，急
已经有9人回复
- 求助北海道大学铸造梯队和九州大学SOFC，PEFC梯队华人博士联系方式，急用，谢谢了
已经有6人回复
- 求助，超急，研究阻燃的请进！！！
已经有46人回复
- 急求助，在线等答案！！！！宁夏大学学报自然科学版
已经有15人回复
- Rosetta求助！！！急
已经有0人回复
- 求煤粉或铸造粉项目的环评报告模板,跪谢!急急急!
已经有2人回复
- 【投稿求助】急！！！求助，投稿JACS都快一周了，还没有with editor 是怎么意思啊
已经有5人回复
- 【求助】急！！！华科同济药理考药理和生理，没有提供指定参考书，请了解的师兄师姐帮
已经有0人回复
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
问题太多了，太宽泛。his taq融合蛋白都用镍螯合高流速琼脂糖凝胶纯化。具体买填料会有说明书。祝顺利。 
5楼2016-05-13 15:57:17
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
简单理解一下问题就是：我该如何表达一个蛋白？楼主你没经验吧，应该是没做过，，， 没做过的知道分析稀有密码子含量很不错， 1.稀有密码子含量，你可以自己分析，你不是在大肠杆菌表达系统嘛，大肠杆菌有自己喜欢和不喜欢的密码子网上一查就知道了（就是密码子优化的步骤）除此之外除了优化密码子还有mRNA结构优化，这就你自己搞了不同的公司有不同的技术（应该属于机密了吧）； 2. 你应该用什么表达菌株，一般正常情况下 BL21（DE3）就可以了，当然如有表达的蛋白有毒性或者其他特性就另说了（可以看下这篇文章，http://www.detaibio.com/topics/yuan-he-biao-da-faq.html，看原核表达FAQ那个，7 8M的打开会有点慢，里面说的挺好）； 3. 你是原核表达 pet系列你都可以选择，带上his也很正常有利于纯化吗，亲和纯化哈 4. 纯化方法？你都his了，当然亲和纯化，至于你说的什么流速什么buffer什么色谱柱，这个。。。。这都需要有蛋白纯化工作经验至少一两年以上的才能准确回答你，这些因素就是实验摸索的一个过程，恰恰是最重要的，针对不同的蛋白性质也不一样，所以没有固定答案，你还是好好学习亲和纯化原理，如何大概操作步骤，中间的试剂等等自己摸索，纯化有时候buffer不对，结果都会千差万别的，有时候还包涵体更麻烦，上清就好些了 5.检测蛋白，检测蛋白比较简单，跑SDS-PAGE就可以，你的蛋白大小多大你是知道的，只需要在胶上面看看有没有表达就行，没有表达那就不好办了，原因多种更要摸索，如果表达量低，可以在做Western blot定性一下，看看到底有没有，实在不放心也可以切胶测序吗，，，提供一些资料：祝好运，资料如下： 蛋白表达系统介绍：原核酵母哺乳动物系统/原理/操作步骤/FAQ SDS=PAGR实验原理/操作步骤/相关FAQ Western blot实验原理/操作步骤/相关FAQ 原核表达FAQ包括蛋白不表达，蛋白表达不在上清 蛋白纯化：http://wenku.baidu.com/view/521ff9cec281e53a5902ff27 |
2楼2016-03-18 16:06:49
【答案】应助回帖
|
蛋白表达系统原核/真核/酵母/哺乳动物系统/原理/操作步骤/FAQ：http://www.detaibio.com/topics/dan-bai-biao-da.html 蛋白不表达，蛋白表达不在上清：http://www.detaibio.com/topics/yuan-he-biao-da-faq.html SDS-PAGE实验原理/步骤/FAQ：http://www.detaibio.com/topics/sds-page-technology.html Western blot原理实验操作FAQ：http://www.detaibio.com/material-western-blot.html |
3楼2016-03-18 16:10:40
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告，其它区发广告仍属违规 2016-05-05 21:50:08
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告，其它区发广告仍属违规 2016-05-05 21:50:08
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2016-05-04 11:43:08
