应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 求助，急，跪谢！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 811  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

我是胡子

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，急，跪谢！ 已有3人参与

我准备在大肠杆菌中异源表达并纯化Methanosarcina acetivorans中的acetate kinase （基因locus number为MA3606），请问：
1）该基因稀有密码子含量如何？我该使用什么蛋白表达菌株？
2）选择一种pET载体，使该异源表达的蛋白带上C末端的His tag。
3）设计一个纯化方法，将该蛋白纯化（注明用什么buffer，什么色谱柱，什么流速，柱与柱之间需要进行什么处理，如何检测蛋白等）。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-03-16 23:45:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc2015

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告，其它区发广告仍属违规 2016-05-05 21:50:08
本帖内容被屏蔽
4楼2016-05-04 11:43:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
简单理解一下问题就是：我该如何表达一个蛋白？楼主你没经验吧，应该是没做过，，，
没做过的知道分析稀有密码子含量很不错，
1.稀有密码子含量，你可以自己分析，你不是在大肠杆菌表达系统嘛，大肠杆菌有自己喜欢和不喜欢的密码子网上一查就知道了（就是密码子优化的步骤）除此之外除了优化密码子还有mRNA结构优化，这就你自己搞了不同的公司有不同的技术（应该属于机密了吧）；
2. 你应该用什么表达菌株，一般正常情况下 BL21（DE3）就可以了，当然如有表达的蛋白有毒性或者其他特性就另说了（可以看下这篇文章，http://www.detaibio.com/topics/yuan-he-biao-da-faq.html，看原核表达FAQ那个，7 8M的打开会有点慢，里面说的挺好）；
3. 你是原核表达 pet系列你都可以选择，带上his也很正常有利于纯化吗，亲和纯化哈
4. 纯化方法？你都his了，当然亲和纯化，至于你说的什么流速什么buffer什么色谱柱，这个。。。。这都需要有蛋白纯化工作经验至少一两年以上的才能准确回答你，这些因素就是实验摸索的一个过程，恰恰是最重要的，针对不同的蛋白性质也不一样，所以没有固定答案，你还是好好学习亲和纯化原理，如何大概操作步骤，中间的试剂等等自己摸索，纯化有时候buffer不对，结果都会千差万别的，有时候还包涵体更麻烦，上清就好些了
5.检测蛋白，检测蛋白比较简单，跑SDS-PAGE就可以，你的蛋白大小多大你是知道的，只需要在胶上面看看有没有表达就行，没有表达那就不好办了，原因多种更要摸索，如果表达量低，可以在做Western blot定性一下，看看到底有没有，实在不放心也可以切胶测序吗，，，提供一些资料：祝好运，资料如下：
蛋白表达系统介绍：原核酵母哺乳动物系统/原理/操作步骤/FAQ
SDS=PAGR实验原理/操作步骤/相关FAQ
Western blot实验原理/操作步骤/相关FAQ
原核表达FAQ包括蛋白不表达，蛋白表达不在上清
蛋白纯化：http://wenku.baidu.com/view/521ff9cec281e53a5902ff27
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-03-18 16:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白表达系统原核/真核/酵母/哺乳动物系统/原理/操作步骤/FAQ：http://www.detaibio.com/topics/dan-bai-biao-da.html
蛋白不表达，蛋白表达不在上清：http://www.detaibio.com/topics/yuan-he-biao-da-faq.html
SDS-PAGE实验原理/步骤/FAQ：http://www.detaibio.com/topics/sds-page-technology.html
Western blot原理实验操作FAQ：http://www.detaibio.com/material-western-blot.html
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-18 16:10:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

问题太多了，太宽泛。his  taq融合蛋白都用镍螯合高流速琼脂糖凝胶纯化。具体买填料会有说明书。祝顺利。
赞一下 回复此楼
5楼2016-05-13 15:57:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +10 Micky11223 2026-03-25 12/600 2026-03-27 09:41 by caszguilin
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +4 zhubinhao 2026-03-27 4/200 2026-03-27 09:38 by caszguilin
[考研] 340求调剂 +3 jhx777 2026-03-27 3/150 2026-03-27 08:56 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +5 荷包蛋hyj 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:07 by hypershenger
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +4 YYYYYNNNNN 2026-03-26 4/200 2026-03-26 19:00 by macy2011
[考研] 考研调剂 +8 小蜡新笔 2026-03-26 8/400 2026-03-26 16:18 by dick_runner
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭