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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 摇瓶发酵大肠杆菌基因工程菌表达蛋白
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)

[求助] 摇瓶发酵大肠杆菌基因工程菌表达蛋白 已有2人参与

摇瓶LB发酵大肠杆菌基因工程菌表达蛋白，IPTG诱导几个小时后发酵液变澄清，什么原因，噬菌体吗，测pH和正常时无差别，无其他现象，有遇到过这种问题的吗，如何解决，请各位大神指教
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
1楼 2016-03-16 16:23:15
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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这种现象已经有好多帖子在说了，噬菌体污染的可能性很大，建议更换克隆进行重新诱导。然后转接时试管和摇瓶都不要加抗性，溶菌的瓶子及菌液不要随意倾倒。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
3楼2016-03-16 18:39:32
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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4楼: Originally posted by hanwei1150 at 2016-03-17 09:33:49
为什么转接时试管和摇瓶都不要加抗性，
更换克隆进行重新诱导，有哪些需要注意的细节...

我们也是实验时发现的规律，当然各实验室环境不一样，一般验证正确的克隆我们后续诱导发酵都不加抗了。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
5楼2016-03-17 10:22:01
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
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本帖内容被屏蔽
9楼2016-03-19 09:58:42
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乐事猫

新虫 (小有名气)
噬菌体感染后 ph会下降

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2楼2016-03-16 16:55:56
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-16 18:39:32
这种现象已经有好多帖子在说了，噬菌体污染的可能性很大，建议更换克隆进行重新诱导。然后转接时试管和摇瓶都不要加抗性，溶菌的瓶子及菌液不要随意倾倒。

为什么转接时试管和摇瓶都不要加抗性，
更换克隆进行重新诱导，有哪些需要注意的细节
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
4楼2016-03-17 09:33:49
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-17 10:22:01
我们也是实验时发现的规律，当然各实验室环境不一样，一般验证正确的克隆我们后续诱导发酵都不加抗了。
...

你是说不加抗性诱导后问题会有所改善？
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
6楼2016-03-17 10:52:21
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 乐事猫 at 2016-03-16 16:55:56
噬菌体感染后 ph会下降

噬菌体感染后pH不是上升的吗
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
7楼2016-03-17 10:53:28
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乐事猫

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hanwei1150 at 2016-03-17 10:53:28
噬菌体感染后pH不是上升的吗...

噬菌体使溶氧和ph下降

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8楼2016-03-18 01:09:08
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-19 09:58:42
加抗性就是防止质粒丢失，前期你加了抗生素，筛选效果就没那么好了，因为接下来的上罐发酵是不加抗生素的（加了抗生素，你要在后续的检测里增加一条，检测抗生素的残留，还有把抗生素给去除了）。如果你的菌在补加 ...

1.加抗性就是防止质粒丢失，前期你加了抗生素，筛选效果就没那么好了，  您指的是不如不加抗生素的筛选效果好？为什么？
2.我接触到的上罐发酵都是加抗生素的啊，“加了抗生素，你要在后续的检测里增加一条，检测抗生素的残留，还有把抗生素给去除了”，请问为什么？
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
10楼2016-03-24 15:59:31
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