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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 摇瓶发酵大肠杆菌基因工程菌表达蛋白
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)

[求助] 摇瓶发酵大肠杆菌基因工程菌表达蛋白 已有2人参与

摇瓶LB发酵大肠杆菌基因工程菌表达蛋白，IPTG诱导几个小时后发酵液变澄清，什么原因，噬菌体吗，测pH和正常时无差别，无其他现象，有遇到过这种问题的吗，如何解决，请各位大神指教
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
1楼 2016-03-16 16:23:15
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-16 18:39:32
这种现象已经有好多帖子在说了，噬菌体污染的可能性很大，建议更换克隆进行重新诱导。然后转接时试管和摇瓶都不要加抗性，溶菌的瓶子及菌液不要随意倾倒。

为什么转接时试管和摇瓶都不要加抗性，
更换克隆进行重新诱导，有哪些需要注意的细节
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
4楼2016-03-17 09:33:49
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-17 10:22:01
我们也是实验时发现的规律，当然各实验室环境不一样，一般验证正确的克隆我们后续诱导发酵都不加抗了。
...

你是说不加抗性诱导后问题会有所改善？
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
6楼2016-03-17 10:52:21
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 乐事猫 at 2016-03-16 16:55:56
噬菌体感染后 ph会下降

噬菌体感染后pH不是上升的吗
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
7楼2016-03-17 10:53:28
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-19 09:58:42
加抗性就是防止质粒丢失，前期你加了抗生素，筛选效果就没那么好了，因为接下来的上罐发酵是不加抗生素的（加了抗生素，你要在后续的检测里增加一条，检测抗生素的残留，还有把抗生素给去除了）。如果你的菌在补加 ...

1.加抗性就是防止质粒丢失，前期你加了抗生素，筛选效果就没那么好了，  您指的是不如不加抗生素的筛选效果好？为什么？
2.我接触到的上罐发酵都是加抗生素的啊，“加了抗生素，你要在后续的检测里增加一条，检测抗生素的残留，还有把抗生素给去除了”，请问为什么？
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
10楼2016-03-24 15:59:31
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-19 09:58:42
加抗性就是防止质粒丢失，前期你加了抗生素，筛选效果就没那么好了，因为接下来的上罐发酵是不加抗生素的（加了抗生素，你要在后续的检测里增加一条，检测抗生素的残留，还有把抗生素给去除了）。如果你的菌在补加 ...

接种前传代次数多一代是不是也容易导致质粒丢失？
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
11楼2016-03-24 16:02:16
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by hanwei1150 at 2016-03-17 09:33:49
为什么转接时试管和摇瓶都不要加抗性，
更换克隆进行重新诱导，有哪些需要注意的细节...

最近还是在解决这个问题，发现和诱导剂诱导没什么关系，好像是长到一定阶段（OD600值2左右，正常加抗生素摇瓶发酵）就变成澄清了，是不是到对数生长期质粒丢失了？谢谢
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
12楼2016-03-24 16:08:59
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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13楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 19:33:36
我觉得不加抗生素筛选效果好，是基于发酵中不加抗生素的。发酵要的是蛋白，这个蛋白是要药用的，所以就不加抗生素了，我知道的都没有加抗生素的...

请问“加抗性就是防止质粒丢失”，如何解释，谢谢
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
15楼2016-03-24 19:51:38
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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14楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 19:36:51
其实不应该这么想吧，菌液变澄清，首先考虑的是噬菌体感染，你可以做一下噬菌斑的验证。质粒丢失的话，你想想，怎么会全部都丢失了呢，没有丢失的那种应该会成为优势菌继续得以生长的才对...

应该排除噬菌体，我今天做菌种（表达其他蛋白）摇瓶发酵，发现没问题；如果不加抗生素的摇瓶没问题能说明什么问题？
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
16楼2016-03-24 19:55:48
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
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17楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 20:29:41
若是这样的话，那恭喜你，找到原因所在了。我们遇到过，配制抗生素的水要用灭菌后的水来配制，不然就是或染噬菌体，就是生长起来后降解了...

昨天的实验表明，表达其他蛋白的菌种摇瓶发酵没问题；与加不加抗生素没关系，长到一定阶段就变澄清了，麻烦分析一下
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
19楼2016-03-25 08:28:36
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