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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-19 09:58:42
加抗性就是防止质粒丢失,前期你加了抗生素,筛选效果就没那么好了,因为接下来的上罐发酵是不加抗生素的(加了抗生素,你要在后续的检测里增加一条,检测抗生素的残留,还有把抗生素给去除了)。如果你的菌在补加 ...

接种前传代次数多一代是不是也容易导致质粒丢失?
HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
11楼2016-03-24 16:02:16
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by hanwei1150 at 2016-03-17 09:33:49
为什么转接时试管和摇瓶都不要加抗性,
更换克隆进行重新诱导,有哪些需要注意的细节...

最近还是在解决这个问题,发现和诱导剂诱导没什么关系,好像是长到一定阶段(OD600值2左右,正常加抗生素摇瓶发酵)就变成澄清了,是不是到对数生长期质粒丢失了?谢谢
HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
12楼2016-03-24 16:08:59
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-字仲康

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13楼2016-03-24 19:33:36
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-字仲康

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14楼2016-03-24 19:36:51
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)

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13楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 19:33:36
我觉得不加抗生素筛选效果好,是基于发酵中不加抗生素的。发酵要的是蛋白,这个蛋白是要药用的,所以就不加抗生素了,我知道的都没有加抗生素的...

请问“加抗性就是防止质粒丢失”,如何解释,谢谢
HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
15楼2016-03-24 19:51:38
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)

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14楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 19:36:51
其实不应该这么想吧,菌液变澄清,首先考虑的是噬菌体感染,你可以做一下噬菌斑的验证。质粒丢失的话,你想想,怎么会全部都丢失了呢,没有丢失的那种应该会成为优势菌继续得以生长的才对...

应该排除噬菌体,我今天做菌种(表达其他蛋白)摇瓶发酵,发现没问题;如果不加抗生素的摇瓶没问题能说明什么问题?
HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
16楼2016-03-24 19:55:48
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-字仲康

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★ ★ ★
hanwei1150: 金币+3, 有帮助 2016-03-25 08:25:32
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17楼2016-03-24 20:29:41
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-字仲康

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18楼2016-03-24 20:31:09
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)

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17楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 20:29:41
若是这样的话,那恭喜你,找到原因所在了。我们遇到过,配制抗生素的水要用灭菌后的水来配制,不然就是或染噬菌体,就是生长起来后降解了...

昨天的实验表明,表达其他蛋白的菌种摇瓶发酵没问题;与加不加抗生素没关系,长到一定阶段就变澄清了,麻烦分析一下
HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
19楼2016-03-25 08:28:36
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 20:29:41
若是这样的话,那恭喜你,找到原因所在了。我们遇到过,配制抗生素的水要用灭菌后的水来配制,不然就是或染噬菌体,就是生长起来后降解了...

您指菌体降解?
HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
20楼2016-03-25 08:29:26
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