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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 摇瓶发酵大肠杆菌基因工程菌表达蛋白
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-19 09:58:42
加抗性就是防止质粒丢失，前期你加了抗生素，筛选效果就没那么好了，因为接下来的上罐发酵是不加抗生素的（加了抗生素，你要在后续的检测里增加一条，检测抗生素的残留，还有把抗生素给去除了）。如果你的菌在补加 ...

接种前传代次数多一代是不是也容易导致质粒丢失？
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
11楼2016-03-24 16:02:16
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hanwei1150 at 2016-03-17 09:33:49
为什么转接时试管和摇瓶都不要加抗性，
更换克隆进行重新诱导，有哪些需要注意的细节...

最近还是在解决这个问题，发现和诱导剂诱导没什么关系，好像是长到一定阶段（OD600值2左右，正常加抗生素摇瓶发酵）就变成澄清了，是不是到对数生长期质粒丢失了？谢谢
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
12楼2016-03-24 16:08:59
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
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13楼2016-03-24 19:33:36
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
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14楼2016-03-24 19:36:51
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 19:33:36
我觉得不加抗生素筛选效果好，是基于发酵中不加抗生素的。发酵要的是蛋白，这个蛋白是要药用的，所以就不加抗生素了，我知道的都没有加抗生素的...

请问“加抗性就是防止质粒丢失”，如何解释，谢谢
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
15楼2016-03-24 19:51:38
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 19:36:51
其实不应该这么想吧，菌液变澄清，首先考虑的是噬菌体感染，你可以做一下噬菌斑的验证。质粒丢失的话，你想想，怎么会全部都丢失了呢，没有丢失的那种应该会成为优势菌继续得以生长的才对...

应该排除噬菌体，我今天做菌种（表达其他蛋白）摇瓶发酵，发现没问题；如果不加抗生素的摇瓶没问题能说明什么问题？
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
16楼2016-03-24 19:55:48
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
hanwei1150: 金币+3, ★有帮助 2016-03-25 08:25:32
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17楼2016-03-24 20:29:41
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
18楼2016-03-24 20:31:09
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 20:29:41
若是这样的话，那恭喜你，找到原因所在了。我们遇到过，配制抗生素的水要用灭菌后的水来配制，不然就是或染噬菌体，就是生长起来后降解了...

昨天的实验表明，表达其他蛋白的菌种摇瓶发酵没问题；与加不加抗生素没关系，长到一定阶段就变澄清了，麻烦分析一下
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
19楼2016-03-25 08:28:36
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by -字仲康 at 2016-03-24 20:29:41
若是这样的话，那恭喜你，找到原因所在了。我们遇到过，配制抗生素的水要用灭菌后的水来配制，不然就是或染噬菌体，就是生长起来后降解了...

您指菌体降解？
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
20楼2016-03-25 08:29:26
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