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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化的菌株只有2毫升，怎么扩大培养
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prthefu

木虫 (著名写手)

[交流] 连接转化的菌株只有2毫升，怎么扩大培养 已有5人参与

连接转化好的菌株测序结果正确，但是我现在只有2毫升，后面提质粒，估计这点菌液不够吧，我要怎么扩大培养呢。
是直接去一点接到另一个试管中，还是需要再进行涂板、挑单克隆、培养、测序啊。
刚接触这一部分，还不太懂，望能人多多指教。
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1楼 2016-03-16 09:02:48
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卡维斯

金虫 (正式写手)
★
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进行抗性板划线、挑单克隆活化（4度备用）、LB摇菌培养、测序正确，摇菌先用甘油：菌液=250:750体积比保存菌液，再把剩下的提质粒。保存菌株放在-70，下次可以直接取50-100ul摇菌。
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2楼2016-03-16 09:48:26
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-16 09:48:26
进行抗性板划线、挑单克隆活化（4度备用）、LB摇菌培养、测序正确，摇菌先用甘油：菌液=250:750体积比保存菌液，再把剩下的提质粒。保存菌株放在-70，下次可以直接取50-100ul摇菌。

我想问，我用剩下的菌液，划线和涂平板，这两个都可以吗，还是说那个更好一点？
还有，挑单克隆培养起来之后，还是要送去测序对吧。
后面进行提质粒的时候，我要用多少毫升菌液来提呢？
最后一个问题，保种的菌液，下次再用的时候，怎么用啊，拿出来化开后，就直接取一部分摇菌，那里面的甘油就不考虑了吗？
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3楼2016-03-16 09:55:52
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卡维斯

金虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by prthefu at 2016-03-16 09:55:52
我想问，我用剩下的菌液，划线和涂平板，这两个都可以吗，还是说那个更好一点？
还有，挑单克隆培养起来之后，还是要送去测序对吧。
后面进行提质粒的时候，我要用多少毫升菌液来提呢？
最后一个问题，保种的菌 ...

最好是在抗性板上划线（长单克隆），挑取几个单克隆后再划线（摇菌用），然后需要做一下菌落PCR确定是你的目的条带，送样测序（保险），
后期提质粒按照你的试剂盒要求来（我们一般用20ml体系摇菌，每管收集5ml，收集三管）
保存菌种用时候直接拿出来吸取，不用考虑甘油（前提冻存前混匀）
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4楼2016-03-16 10:38:13
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-16 10:38:13
最好是在抗性板上划线（长单克隆），挑取几个单克隆后再划线（摇菌用），然后需要做一下菌落PCR确定是你的目的条带，送样测序（保险），
后期提质粒按照你的试剂盒要求来（我们一般用20ml体系摇菌，每管收集5ml， ...

我还是不太明白，你说的划线，然后挑了单克隆再划线，这是什么意思啊，
还有，我涂板行不行，划线和涂板到底有什么区别啊，
最后，保种加甘油后，似乎没太混匀就放-20℃了， 这样影响大吗，我放了大概12个小时了，现在再拿回来，化了之后再混匀，还学吗？
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5楼2016-03-16 10:52:33
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卡维斯

金虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by prthefu at 2016-03-16 10:52:33
我还是不太明白，你说的划线，然后挑了单克隆再划线，这是什么意思啊，
还有，我涂板行不行，划线和涂板到底有什么区别啊，
最后，保种加甘油后，似乎没太混匀就放-20℃了， 这样影响大吗，我放了大概12个小时了 ...

你有保存的菌种的话直接用来摇菌就行呀，我以为你只有那个两毫升菌液呢。
PS：第一次划线是长单克隆、第二次划线是扩大培养。
PS2：划线长得单克隆多
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6楼2016-03-16 11:34:57
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原海亮

木虫 (著名写手)
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你验证正确，且测序也正确后，难道不把正确的克隆保种么，如果保了，直接从你甘油管转接试管就可以用来提质粒了，不需要重新划线测序

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
7楼2016-03-16 12:06:42
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wwb95599

铜虫 (小有名气)
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2ml 直接取100ul至100ml培养基中，加上相应抗生素，进行培养。然后做个菌落PCR，如果有目的条带，拿去测序。当然如果以前做过测序的话，就不需要再测啦。
至于划线培养或涂平板，这个如果你不嫌麻烦的话，也是可以的。

至于保存，加终浓度为10%的甘油，混匀后保存就行了。一般－20度，几个月没问题。建立放些至－80度里面，长期保存。
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只要路是对的，就不怕路远．
8楼2016-03-17 16:51:24
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alarace

至尊木虫 (知名作家)
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2mL菌液，这么多，能干好多事.
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9楼2016-03-17 18:19:51
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李俊超

新虫 (初入文坛)
★
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挑取的单克隆保藏菌株直接接菌摇6-8h后就可以提质粒了，不用测序了。
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10楼2016-03-17 20:56:51
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