应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化的菌株只有2毫升，怎么扩大培养
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2602  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

prthefu

木虫 (著名写手)

[交流] 连接转化的菌株只有2毫升，怎么扩大培养 已有5人参与

连接转化好的菌株测序结果正确，但是我现在只有2毫升，后面提质粒，估计这点菌液不够吧，我要怎么扩大培养呢。
是直接去一点接到另一个试管中，还是需要再进行涂板、挑单克隆、培养、测序啊。
刚接触这一部分，还不太懂，望能人多多指教。
回复此楼

» 猜你喜欢
nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
1楼 2016-03-16 09:02:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by prthefu at 2016-03-16 09:55:52
我想问，我用剩下的菌液，划线和涂平板，这两个都可以吗，还是说那个更好一点？
还有，挑单克隆培养起来之后，还是要送去测序对吧。
后面进行提质粒的时候，我要用多少毫升菌液来提呢？
最后一个问题，保种的菌 ...

最好是在抗性板上划线（长单克隆），挑取几个单克隆后再划线（摇菌用），然后需要做一下菌落PCR确定是你的目的条带，送样测序（保险），
后期提质粒按照你的试剂盒要求来（我们一般用20ml体系摇菌，每管收集5ml，收集三管）
保存菌种用时候直接拿出来吸取，不用考虑甘油（前提冻存前混匀）
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-16 10:38:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

卡维斯

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
进行抗性板划线、挑单克隆活化（4度备用）、LB摇菌培养、测序正确，摇菌先用甘油：菌液=250:750体积比保存菌液，再把剩下的提质粒。保存菌株放在-70，下次可以直接取50-100ul摇菌。
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-16 09:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-16 09:48:26
进行抗性板划线、挑单克隆活化（4度备用）、LB摇菌培养、测序正确，摇菌先用甘油：菌液=250:750体积比保存菌液，再把剩下的提质粒。保存菌株放在-70，下次可以直接取50-100ul摇菌。

我想问，我用剩下的菌液，划线和涂平板，这两个都可以吗，还是说那个更好一点？
还有，挑单克隆培养起来之后，还是要送去测序对吧。
后面进行提质粒的时候，我要用多少毫升菌液来提呢？
最后一个问题，保种的菌液，下次再用的时候，怎么用啊，拿出来化开后，就直接取一部分摇菌，那里面的甘油就不考虑了吗？
赞一下 回复此楼
nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
3楼2016-03-16 09:55:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-16 10:38:13
最好是在抗性板上划线（长单克隆），挑取几个单克隆后再划线（摇菌用），然后需要做一下菌落PCR确定是你的目的条带，送样测序（保险），
后期提质粒按照你的试剂盒要求来（我们一般用20ml体系摇菌，每管收集5ml， ...

我还是不太明白，你说的划线，然后挑了单克隆再划线，这是什么意思啊，
还有，我涂板行不行，划线和涂板到底有什么区别啊，
最后，保种加甘油后，似乎没太混匀就放-20℃了， 这样影响大吗，我放了大概12个小时了，现在再拿回来，化了之后再混匀，还学吗？
赞一下 回复此楼
nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
5楼2016-03-16 10:52:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 7/350 2026-03-27 01:05 by muchong357
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +7 NIFFFfff 2026-03-20 7/350 2026-03-26 20:45 by 不吃魚的貓
[考研] 303求调剂 +7 元夕元 2026-03-20 8/400 2026-03-26 20:38 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 材料调剂 +7 匹克i 2026-03-23 7/350 2026-03-26 19:00 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂推荐 +4 清酒714 2026-03-26 5/250 2026-03-26 17:49 by fmesaito
[考研] 352求调剂 +4 大米饭！ 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 7/350 2026-03-26 16:07 by 不吃魚的貓
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +17 tcxiaoxx 2026-03-20 19/950 2026-03-26 16:04 by 不吃魚的貓
[考研] 材料277求调剂 +5 min3 2026-03-24 5/250 2026-03-26 15:13 by zzll406
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭