应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化的菌株只有2毫升，怎么扩大培养
51/1返回列表
查看: 2767  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

prthefu

木虫 (著名写手)

[交流] 连接转化的菌株只有2毫升，怎么扩大培养 已有5人参与

连接转化好的菌株测序结果正确，但是我现在只有2毫升，后面提质粒，估计这点菌液不够吧，我要怎么扩大培养呢。
是直接去一点接到另一个试管中，还是需要再进行涂板、挑单克隆、培养、测序啊。
刚接触这一部分，还不太懂，望能人多多指教。
回复此楼

» 猜你喜欢
nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
1楼 2016-03-16 09:02:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by prthefu at 2016-03-16 09:55:52
我想问，我用剩下的菌液，划线和涂平板，这两个都可以吗，还是说那个更好一点？
还有，挑单克隆培养起来之后，还是要送去测序对吧。
后面进行提质粒的时候，我要用多少毫升菌液来提呢？
最后一个问题，保种的菌 ...

最好是在抗性板上划线（长单克隆），挑取几个单克隆后再划线（摇菌用），然后需要做一下菌落PCR确定是你的目的条带，送样测序（保险），
后期提质粒按照你的试剂盒要求来（我们一般用20ml体系摇菌，每管收集5ml，收集三管）
保存菌种用时候直接拿出来吸取，不用考虑甘油（前提冻存前混匀）
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-16 10:38:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

卡维斯

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
进行抗性板划线、挑单克隆活化（4度备用）、LB摇菌培养、测序正确，摇菌先用甘油：菌液=250:750体积比保存菌液，再把剩下的提质粒。保存菌株放在-70，下次可以直接取50-100ul摇菌。
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-16 09:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-16 09:48:26
进行抗性板划线、挑单克隆活化（4度备用）、LB摇菌培养、测序正确，摇菌先用甘油：菌液=250:750体积比保存菌液，再把剩下的提质粒。保存菌株放在-70，下次可以直接取50-100ul摇菌。

我想问，我用剩下的菌液，划线和涂平板，这两个都可以吗，还是说那个更好一点？
还有，挑单克隆培养起来之后，还是要送去测序对吧。
后面进行提质粒的时候，我要用多少毫升菌液来提呢？
最后一个问题，保种的菌液，下次再用的时候，怎么用啊，拿出来化开后，就直接取一部分摇菌，那里面的甘油就不考虑了吗？
赞一下 回复此楼
nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
3楼2016-03-16 09:55:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-16 10:38:13
最好是在抗性板上划线（长单克隆），挑取几个单克隆后再划线（摇菌用），然后需要做一下菌落PCR确定是你的目的条带，送样测序（保险），
后期提质粒按照你的试剂盒要求来（我们一般用20ml体系摇菌，每管收集5ml， ...

我还是不太明白，你说的划线，然后挑了单克隆再划线，这是什么意思啊，
还有，我涂板行不行，划线和涂板到底有什么区别啊，
最后，保种加甘油后，似乎没太混匀就放-20℃了， 这样影响大吗，我放了大概12个小时了，现在再拿回来，化了之后再混匀，还学吗？
赞一下 回复此楼
nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
5楼2016-03-16 10:52:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 08:28 by xiangy672
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭