应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » Q5高保真酶PCR产物怎么添加A尾
111/1返回列表
查看: 3045  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

for_margaret

新虫 (小有名气)

[交流] Q5高保真酶PCR产物怎么添加A尾

妹子化学本科转生物研究生，小白一个，刚入小木虫，木有存货，全献给大神们了。
我的Forward引物和Reverse引物5'端都是A，用Q5高保真酶进行PCR后需要将产物通过T4链接酶链接到pGEM载体上，请问还需要额外加A尾吗？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2016-03-15 22:37:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qwbio

新虫 (初入文坛)
★ ★
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
for_margaret: 金币+1 2016-03-16 01:50:17
PCR合成的是双链，但加 A 得目的是要一个末端游离的碱基，为了与 T 载体的T碱基粘性末端互补（氢键生成）。加A 也不难。
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-15 23:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for_margaret

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qwbio at 2016-03-15 23:23:01
PCR合成的是双链，但加 A 得目的是要一个末端游离的碱基，为了与 T 载体的T碱基粘性末端互补（氢键生成）。加A 也不难。

是这个理儿。那我能把dATP和pGEM一起加进反应体系让它们一起玩耍吗？链接酶是T4

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-03-16 01:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wang2568

银虫 (小有名气)
★
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
内容已删除
回复此楼
7楼2016-03-16 10:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for_margaret

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wang2568 at 2016-03-16 10:40:45
TA克隆，去下载个相关产品说明书做，高保真可能不能加A

高保真为什么不能加A尾呀？我做的高保真是从cDNA克隆DNA产物，不是用高保真酶加A尾呀

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-03-16 11:21:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wang2568

银虫 (小有名气)
★
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
你那载体用酶切后会产生粘性末端，然后PCR产物直接混合后连接，再转化，如果效率低，可以浓缩后再涂板。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2016-03-16 13:02:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qwbio

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
for_margaret: 金币+2, 么么哒 2016-03-17 21:52:05
引用回帖:
6楼: Originally posted by for_margaret at 2016-03-16 01:49:57
是这个理儿。那我能把dATP和pGEM一起加进反应体系让它们一起玩耍吗？链接酶是T4
...

加A的简便方法是，高保真的 PCR 产物纯化，加 rTaq Buffer、dNTP mix 和 rTaq DNA 聚合酶，72摄氏度10分钟即可。也就是说，不需要加引物。当然，改用 dATP 的效率更高。
赞一下 回复此楼
10楼2016-03-17 17:55:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for_margaret

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by qwbio at 2016-03-17 17:55:59
加A的简便方法是，高保真的 PCR 产物纯化，加 rTaq Buffer、dNTP mix 和 rTaq DNA 聚合酶，72摄氏度10分钟即可。也就是说，不需要加引物。当然，改用 dATP 的效率更高。...

十分感谢。我该怎么给你小金币呢？不会用呀

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
11楼2016-03-18 01:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
tzynew2楼
2016-03-15 22:49   回复  
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
tzynew3楼
2016-03-15 22:49   回复  
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
baiyang3134楼
2016-03-15 23:04   回复  
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 for_margaret 的主题更新
111/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭