24小时热门版块排行榜    

查看: 3084  |  回复: 10

for_margaret

新虫 (小有名气)


[交流] Q5高保真酶PCR产物怎么添加A尾

妹子化学本科转生物研究生,小白一个,刚入小木虫,木有存货,全献给大神们了。
我的Forward引物和Reverse引物5'端都是A,用Q5高保真酶进行PCR后需要将产物通过T4链接酶链接到pGEM载体上,请问还需要额外加A尾吗?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qwbio

新虫 (初入文坛)


★ ★
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
for_margaret: 金币+1 2016-03-16 01:50:17
PCR合成的是双链,但加 A 得目的是要一个末端游离的碱基,为了与 T 载体的T碱基粘性末端互补(氢键生成)。加A 也不难。
5楼2016-03-15 23:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for_margaret

新虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by qwbio at 2016-03-15 23:23:01
PCR合成的是双链,但加 A 得目的是要一个末端游离的碱基,为了与 T 载体的T碱基粘性末端互补(氢键生成)。加A 也不难。

是这个理儿。那我能把dATP和pGEM一起加进反应体系让它们一起玩耍吗?链接酶是T4

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-03-16 01:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wang2568

银虫 (小有名气)



for_margaret(金币+1): 谢谢参与
内容已删除
7楼2016-03-16 10:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for_margaret

新虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by wang2568 at 2016-03-16 10:40:45
TA克隆,去下载个相关产品说明书做,高保真可能不能加A

高保真为什么不能加A尾呀?我做的高保真是从cDNA克隆DNA产物,不是用高保真酶加A尾呀

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-03-16 11:21:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wang2568

银虫 (小有名气)



for_margaret(金币+1): 谢谢参与
你那载体用酶切后会产生粘性末端,然后PCR产物直接混合后连接,再转化,如果效率低,可以浓缩后再涂板。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2016-03-16 13:02:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qwbio

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
for_margaret: 金币+2, 么么哒 2016-03-17 21:52:05
引用回帖:
6楼: Originally posted by for_margaret at 2016-03-16 01:49:57
是这个理儿。那我能把dATP和pGEM一起加进反应体系让它们一起玩耍吗?链接酶是T4
...

加A的简便方法是,高保真的 PCR 产物纯化,加 rTaq Buffer、dNTP mix 和 rTaq DNA 聚合酶,72摄氏度10分钟即可。也就是说,不需要加引物。当然,改用 dATP 的效率更高。
10楼2016-03-17 17:55:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for_margaret

新虫 (小有名气)


引用回帖:
10楼: Originally posted by qwbio at 2016-03-17 17:55:59
加A的简便方法是,高保真的 PCR 产物纯化,加 rTaq Buffer、dNTP mix 和 rTaq DNA 聚合酶,72摄氏度10分钟即可。也就是说,不需要加引物。当然,改用 dATP 的效率更高。...

十分感谢。我该怎么给你小金币呢?不会用呀

发自小木虫IOS客户端
11楼2016-03-18 01:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
tzynew2楼
2016-03-15 22:49   回复  
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
tzynew3楼
2016-03-15 22:49   回复  
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
2016-03-15 23:04   回复  
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 for_margaret 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +5 小小陈小小 2026-03-22 8/400 2026-03-26 14:28 by zzll406
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +6 哈哈157349 2026-03-21 6/300 2026-03-26 10:39 by 醉在风里
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315(英一)求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 一志愿华东理工大学081700,初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
信息提示
请填处理意见