24小时热门版块排行榜    

查看: 3290  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

for_margaret

新虫 (小有名气)


[交流] Q5高保真酶PCR产物怎么添加A尾

妹子化学本科转生物研究生,小白一个,刚入小木虫,木有存货,全献给大神们了。
我的Forward引物和Reverse引物5'端都是A,用Q5高保真酶进行PCR后需要将产物通过T4链接酶链接到pGEM载体上,请问还需要额外加A尾吗?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for_margaret

新虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by qwbio at 2016-03-15 23:23:01
PCR合成的是双链,但加 A 得目的是要一个末端游离的碱基,为了与 T 载体的T碱基粘性末端互补(氢键生成)。加A 也不难。

是这个理儿。那我能把dATP和pGEM一起加进反应体系让它们一起玩耍吗?链接酶是T4

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-03-16 01:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

qwbio

新虫 (初入文坛)


★ ★
for_margaret(金币+1): 谢谢参与
for_margaret: 金币+1 2016-03-16 01:50:17
PCR合成的是双链,但加 A 得目的是要一个末端游离的碱基,为了与 T 载体的T碱基粘性末端互补(氢键生成)。加A 也不难。
5楼2016-03-15 23:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for_margaret

新虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by wang2568 at 2016-03-16 10:40:45
TA克隆,去下载个相关产品说明书做,高保真可能不能加A

高保真为什么不能加A尾呀?我做的高保真是从cDNA克隆DNA产物,不是用高保真酶加A尾呀

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-03-16 11:21:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wang2568

银虫 (小有名气)



for_margaret(金币+1): 谢谢参与
你那载体用酶切后会产生粘性末端,然后PCR产物直接混合后连接,再转化,如果效率低,可以浓缩后再涂板。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2016-03-16 13:02:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +6 zju2000 2026-08-16 6/300 2026-08-17 10:01 by xter9665
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +10 Ldrop2023 2026-08-13 10/500 2026-08-17 09:59 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见