应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 内源性控制是什么意思 最后用GAPDH强度对cDNA校正又是什么原理啊？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
31/1返回列表
查看: 1834  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

辰一笑奈何

新虫 (小有名气)

[求助] 内源性控制是什么意思 最后用GAPDH强度对cDNA校正又是什么原理啊？ 已有1人参与

用试剂盒(Invitrogen, USA)提取RNA并用分光光度计来测量所有RNA的浓度。RNA与低聚糖引物逆转录之后得到单链cDNA，使用DNA聚合酶和两步逆转录PCR的缓冲使其被放大。磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）被用来当做内源性控制。乙酰肝素酶引物：正向引物5’-TTCGATCCCAAGAAGGAATCAAC-3’,反向引物5’-GTAGTGATGC2CATGTAA CTGAATC-3’，扩增片段长度为585 bp。GAPDH引物：正向引物5’-GTCTTCACCACCATGGAGAAGGCT-3’，反向引物 5’-CATGCCAGTGAGCTTCCCGT TCA-3’，扩增片段长度为392 bp。cDNA可以在预变性的PCR热控制器中被扩大，条件为在95 ℃下3分钟，紧接着以95 ℃ 下 30 s, 55 ℃ 下30 s和72 ℃ 下45 s为一个周期，共做30个循环，最后在72 ℃下10分钟扩展。使用GAPDH强度对初始的cDNA总数做校正。最后使用塞恩图像软件使各个波段的强度被量化。重复三次该操作。

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2016-03-15 20:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
GAPDH作为内参基因（内源性控制）
该基因为管家（house keeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提total RNA，poly(A)+ RNA，Western blot等实验操作的标准化的内参
因为GAPDH恒定且表达高，可以通过改变cDNA稀释倍数使扩增后目的条带的亮度（强度量化），进而使其浓度一致。
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-15 21:07:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

辰一笑奈何

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-15 21:07:28
GAPDH作为内参基因（内源性控制）
该基因为管家（house keeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点等的诱导物质的影响而保持恒定， ...

噢   多谢多谢～

发自小木虫Android客户端
回复此楼
3楼2016-03-16 08:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 辰一笑奈何 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +9 JLLLLLLLLLL 2026-04-03 9/450 2026-04-04 19:20 by 猪会飞
[考研] [调剂信息]085408光电信息 求调剂 总分291分数一英一 +3 iz11az 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:09 by 蓝云思雨
[考研] 333求调剂 +9 阿科逸 2026-03-31 9/450 2026-04-04 18:25 by macy2011
[考研] 329求调剂 +13 miaodesi 2026-04-02 15/750 2026-04-04 18:14 by jj987
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-04-04 5/250 2026-04-04 16:45 by cql1109
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +6 cs0106 2026-04-03 6/300 2026-04-04 11:20 by w_xuqing
[考研] 学硕机械工程303求调剂 +6 无名所以叫吴明 2026-03-30 7/350 2026-04-03 16:48 by asdfzly
[硕博家园] 求老师收留 +9 lllq123 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:48 by 呼吸都是减肥
[考研] 298求调剂 +5 种圣赐 2026-03-28 5/250 2026-04-03 12:26 by xingguangj
[考研] 085600 295分求调剂 +19 W55j 2026-03-30 23/1150 2026-04-03 09:53 by 千千运气
[考研] 复试调剂 +3 bvzz 2026-04-01 3/150 2026-04-03 09:47 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北京科技材料科学与工程288分，求调剂 +14 是辰啊 2026-04-02 14/700 2026-04-02 21:10 by dongzh2009
[考研] 346求调剂 +5 郑诚乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 16:38 by SZW_UJN
[考研] 348求调剂 +6 吴彦祖24k 2026-04-02 6/300 2026-04-02 14:07 by 给你你注意休息
[考研] 324求调剂 +5 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 10:16 by sanrepian
[考研] 286求调剂 +5 Sa67890. 2026-04-01 7/350 2026-04-01 19:50 by 6781022
[考研] 070300化学专业279调剂 +10 哈哈哈^_^ 2026-03-31 10/500 2026-03-31 23:13 by liu823948201
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 麦恩莉. 2026-03-30 4/200 2026-03-31 14:35 by 记事本2026
[考研] 求调剂 +8 11ggg 2026-03-30 8/400 2026-03-31 13:56 by nanaliuyun
[考博] 材料专业申博 +5 杜雨婷dyt 2026-03-29 5/250 2026-03-31 11:19 by oooqiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭