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内源性控制是什么意思 最后用GAPDH强度对cDNA校正又是什么原理啊？ 已有1人参与
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用试剂盒(Invitrogen, USA)提取RNA并用分光光度计来测量所有RNA的浓度。RNA与低聚糖引物逆转录之后得到单链cDNA，使用DNA聚合酶和两步逆转录PCR的缓冲使其被放大。磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）被用来当做内源性控制。乙酰肝素酶引物：正向引物5’-TTCGATCCCAAGAAGGAATCAAC-3’,反向引物5’-GTAGTGATGC2CATGTAA CTGAATC-3’，扩增片段长度为585 bp。GAPDH引物：正向引物5’-GTCTTCACCACCATGGAGAAGGCT-3’，反向引物 5’-CATGCCAGTGAGCTTCCCGT TCA-3’，扩增片段长度为392 bp。cDNA可以在预变性的PCR热控制器中被扩大，条件为在95 ℃下3分钟，紧接着以95 ℃ 下 30 s, 55 ℃ 下30 s和72 ℃ 下45 s为一个周期，共做30个循环，最后在72 ℃下10分钟扩展。使用GAPDH强度对初始的cDNA总数做校正。最后使用塞恩图像软件使各个波段的强度被量化。重复三次该操作。 发自小木虫Android客户端 |
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