| 查看: 3958 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
aixiachun铜虫 (小有名气)
|
[求助]
酿酒酵母感受态转化质粒和片段效率都很低，只长几个，跪求大神们帮忙 已有2人参与
|
|
|
我利用酿酒酵母同源重组机制，把有同源臂的片段和线性载体导入酿酒酵母感受态，想获得重组质粒，但是感受态效率一致很低，正对照转化的质粒最好的时候也才长了10的3次方（转化DNA约一共有1.2ug），实在是没有办法了，求大神们帮帮忙 我的实验方法： 1.挑单菌落到5mLYPD, 培养约14h。 2.然后以1:50转接到100mLYPD，30度，200rpm培养约6h至OD600=0.8. 3.菌体在4度4000rpm离心5min，倾去培养基。 4.冰冷无菌水洗涤，4度4000rpm离心5min。 5.冰冷的1M山梨醇洗涤，4度4000rpm离心5min。重复一次。 6.菌体重悬在200uL冰冷的1M山梨醇，每管分装50uL。 7.加入<5uL的DNA，轻弹混匀，然后加入到-20度预冷的电转杯，1.5kv电击，立即加入1mL室温的1M山梨醇，30度，200rpm复壮2h，然后涂布在相应的筛选平板。 请问我实验哪里有问题呢？ 还有，酿酒酵母的感受态效率多高才算好呢？ 谢谢了！  |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有5人回复
-
我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有18人回复
-
国自然评审意见
已经有15人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有13人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有14人回复
-
系统查不到
已经有11人回复
3楼2016-03-14 09:35:21
aixiachun
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 30.6
- 散金: 4
- 帖子: 80
- 在线: 120小时
- 虫号: 3257552
- 注册: 2014-06-05
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2016-03-14 08:20:49
aixiachun
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 30.6
- 散金: 4
- 帖子: 80
- 在线: 120小时
- 虫号: 3257552
- 注册: 2014-06-05
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2016-03-14 09:39:44
5楼2016-03-14 12:00:37
