| 查看: 3953 | 回复: 13 | ||
aixiachun铜虫 (小有名气)
|
[求助]
酿酒酵母感受态转化质粒和片段效率都很低，只长几个，跪求大神们帮忙 已有2人参与
|
|
我利用酿酒酵母同源重组机制，把有同源臂的片段和线性载体导入酿酒酵母感受态，想获得重组质粒，但是感受态效率一致很低，正对照转化的质粒最好的时候也才长了10的3次方（转化DNA约一共有1.2ug），实在是没有办法了，求大神们帮帮忙 我的实验方法： 1.挑单菌落到5mLYPD, 培养约14h。 2.然后以1:50转接到100mLYPD，30度，200rpm培养约6h至OD600=0.8. 3.菌体在4度4000rpm离心5min，倾去培养基。 4.冰冷无菌水洗涤，4度4000rpm离心5min。 5.冰冷的1M山梨醇洗涤，4度4000rpm离心5min。重复一次。 6.菌体重悬在200uL冰冷的1M山梨醇，每管分装50uL。 7.加入<5uL的DNA，轻弹混匀，然后加入到-20度预冷的电转杯，1.5kv电击，立即加入1mL室温的1M山梨醇，30度，200rpm复壮2h，然后涂布在相应的筛选平板。 请问我实验哪里有问题呢？ 还有，酿酒酵母的感受态效率多高才算好呢？ 谢谢了！  |
回复此楼» 猜你喜欢
国自然评审意见
已经有8人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有14人回复
-
系统查不到
已经有11人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有18人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有12人回复
-
有没有仍没收到信息的
已经有3人回复
-
导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！
已经有8人回复
-
基金不中，共勉
已经有11人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有9人回复
-
2026年叶企孙基金
已经有6人回复
aixiachun
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 30.6
- 散金: 4
- 帖子: 80
- 在线: 120小时
- 虫号: 3257552
- 注册: 2014-06-05
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2016-03-14 08:20:49
3楼2016-03-14 09:35:21
aixiachun
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 30.6
- 散金: 4
- 帖子: 80
- 在线: 120小时
- 虫号: 3257552
- 注册: 2014-06-05
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2016-03-14 09:39:44
5楼2016-03-14 12:00:37
aixiachun
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 30.6
- 散金: 4
- 帖子: 80
- 在线: 120小时
- 虫号: 3257552
- 注册: 2014-06-05
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2016-03-14 16:26:31
aixiachun
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 30.6
- 散金: 4
- 帖子: 80
- 在线: 120小时
- 虫号: 3257552
- 注册: 2014-06-05
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2016-03-14 16:26:59
瘸腿猎豹
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 83
- 散金: 5
- 帖子: 8
- 在线: 3.8小时
- 虫号: 4293330
- 注册: 2015-12-16
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
8楼2016-05-13 13:19:37
kingjazz23
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 896.1
- 散金: 20
- 帖子: 261
- 在线: 83.1小时
- 虫号: 2581130
- 注册: 2013-08-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
9楼2016-07-12 09:16:14
aixiachun
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 30.6
- 散金: 4
- 帖子: 80
- 在线: 120小时
- 虫号: 3257552
- 注册: 2014-06-05
- 专业: 微生物生理与生物化学
10楼2016-07-12 18:10:41
10