应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » CRISPR/Cas系列问题
51/1返回列表
查看: 2366  |  回复: 33
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

kingjazz23

金虫 (小有名气)

[求助] CRISPR/Cas系列问题 已有1人参与

您们好，今年研一下学期老板打算做CRISPR/Cas，叫我查查问题，我们打算做酵母的CRISPR/Cas，看了几篇文献，有些问题不是很懂，所以想问问你们：
（1）在paper中经常会看到一个a premature stop codon，想问问他有什么作用，一般看到都是用研究人员在PAM的位置引入的，不太清楚他们的意图是什么？
（2）经常在paper中看到gRNA cassette和plasmid，我知道plasmid是质粒的意思，而前面那个cassette不太清楚是什么意思，在DiCarlo的一篇文献中，他提到了两种gRNA的表达方法，一个是gRNA PCR cassette还有一个是gRNA plasmid，这两个到底有什么区别？
（3）经常在文章中出现的target sequence是存在于gRNA上的那段识别目标DNA的序列还是指含有PAM序列那段序列？
（4）文章中有时候会出现的tRNA是指tracrRNA吗？
（5）同样是在DiCarlo那篇文献中，其中有一句话是Donor DNA was designed to recombine within the gRNA CAN1.Y genomic target using homology arms to the site，
想问问这句话是什么意思？Donor DNA不是应该与基因组序列配对吗？通过同源臂进行修复，达到替换的效果，这里为什么说是与gRNA结合呢?
（6）文献中常常出现的oligonucleotide是指Donor DNA吗?

以上这些就是本人一些不太理解的地方，希望各路大神帮忙解决一下，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-03-11 17:17:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ken19860823

木虫 (正式写手)
和转录终止。一个pcr片段包含U6和sgrna序列就可以转染到细胞里短暂表达sgrna。也可以克隆到质粒里瞬时转染细胞表达。3.target位点都必须含有pam，sgrna根据target位点来的，但是一定不含pam序列。4.不是。5.grna作用是识别目标，cas9切割识别位点。donor是同源重组模板。6.引物就是一段oligonucleotide.ssODN就是一段oligonucleotide，因为可以作为同源重组模板经常被提到

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
做基因修饰的老菜鸡
5楼2016-03-11 21:15:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 34 个回答

王继楼马

新虫 (小有名气)
已关注这个问题，目前课题涉及CRISPR-CAS9，原理还是懂，先推荐楼主看中文的说明再去看英文的文献，会好很多。因为很多概念你只有中文才能理解透彻。抱歉先关注，这两天闲下来的时候再共同讨论。
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-11 20:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ken19860823

木虫 (正式写手)
1.蛋白质翻译起始于atg,终止于三个终止子。如果前面的序列提前突变成终止子就是premature stop codon了。。2.一个表达单元叫cassette，包含启动子cds

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
做基因修饰的老菜鸡
3楼2016-03-11 21:06:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happykings

木虫 (正式写手)
可以交流，我也正想做

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-11 21:09:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 34 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 085602 289分求调剂 +4 WWW西西弗斯 2026-03-24 4/200 2026-03-24 16:13 by 星空星月
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕，求调剂 6+3 糖葫芦888ll 2026-03-22 6/300 2026-03-24 15:05 by 123456zjm
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +4 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 4/200 2026-03-24 07:32 by wangy0907
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +6 ￣^￣゜汗 2026-03-19 9/450 2026-03-23 19:53 by pswait
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +5 jiajunX 2026-03-22 5/250 2026-03-23 18:07 by YMU施老师
[考研] 316求调剂 +7 梁茜雯 2026-03-19 7/350 2026-03-23 16:21 by lingjue
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭