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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 过镍柱的几个问题？
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ackee

新虫 (小有名气)

[求助] 过镍柱的几个问题？ 已有1人参与

1，请问用重力法过镍柱的时候，蛋白裂解上清液一般和镍柱混匀多长时间呢？
2，请问用重力法过镍柱的时候，冲柱子的时候一个梯度一般要冲多少个柱体积呢？
3，用AKTA过镍柱的时候，要配什么溶剂呢？
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1楼 2016-03-11 11:42:37
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好，估计你是刚开始做该方向的工作，
混合多长时间，你可参照你购买的镍粒说明书，有的质量好，结合好，效率高，，，这个有个大致的范围的，不会很精确
冲柱子，严谨的方法是检测收集的液体，根据相应指标判断是否量足够，一般来说，冲得体积越多，除杂质或者洗脱目标成分会充分些（看具体操作），不足之处出收集的液体量增多，后续浓缩麻烦些
如果用AKTA，可参照他的工作手册，可节省一些摸索时间
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努力的小蜜蜂
3楼2016-03-11 15:27:45
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ackee

新虫 (小有名气)
还有，裂解液与镍柱混合时裂解上清液也需要用0,45um的滤头过滤吗？如果是大蛋白会不会给滤出去？
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2楼2016-03-11 11:45:29
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ackee

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 北国佳人 at 2016-03-11 15:27:45
你好，估计你是刚开始做该方向的工作，
混合多长时间，你可参照你购买的镍粒说明书，有的质量好，结合好，效率高，，，这个有个大致的范围的，不会很精确
冲柱子，严谨的方法是检测收集的液体，根据相应指标判断是 ...

谢谢啦

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4楼2016-03-14 16:49:27
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