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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 镍柱重生后与原先颜色不同
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mtf_victor

新虫 (初入文坛)

[交流] 镍柱重生后与原先颜色不同 已有3人参与

实验室使用的是散装的Ni-NTA beads（Qiagen），没有重生过的Beads的颜色是“天蓝色”。
使用几次之后，我就进行了beads的重生，重生后呈现“浅绿色”。
但实验室的其他人用相同的方法重生他自己使用后的beads，却可以呈“天蓝色”。
镍柱重生后与原先颜色不同
不知道是什么原因，特来询问有经验的人。

重生的方法：
（使用后的beads，浸泡在25%酒精里保存，以备重生。）
1） 5倍柱体积（Column Volume，CV）水洗涤。
2） 2倍EDTA洗去Ni。（柱子呈白色，略黄）
3） 5 CV水洗涤。
4） 0.5 M NaOH 洗涤2CV，浸泡30 min.
5)   5 CV水洗涤。
6)   0.1 M NiSO4 洗涤2 CV，浸泡过夜。
7） 5 CV水洗涤。
8)   2 CV 20% 酒精洗涤，并浸泡保存。

我考虑可能的原因有以下这么几个：
1. 纯化蛋白的过程中，使柱子吸附了某种色素，且该色素在上述重生过程中没有除去。（而其他人纯化的蛋白可能不含这种色素）
2. beads使用时间过长（不是新beads）或者保存、使用不当，导致Ni离子螯合能力下降，使beads只能呈现绿色。

那么问题来了，
beads螯合能力下降会导致这种颜色的变化吗？不是蓝色变浅，而是变成绿色？
会不会有其他原因导致这种变化？
颜色的变化是beads的结合能力的反应吗？
有没有处理方法使beads变回原来的颜色？

谢谢，我是新手，请大家不吝赐教！
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1楼 2015-01-04 13:16:37
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zhang001zh

银虫 (小有名气)
★
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使用500mM的 imidazole洗一下看看
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2楼2015-01-04 13:39:04
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mtf_victor

新虫 (初入文坛)
补充一下，就是我再生过的beads，不脱镍，用0.5 M NaOH洗的话，会在几分钟内变成褐色，别人的就不会。
有人说变褐色是因为Ni(OH)2沉淀，但是Ni(OH)2沉淀的颜色不应该是白色的吗？
请大家一并诊治。
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3楼2015-01-04 18:35:55
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lijing1212

禁虫 (初入文坛)
★
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4楼2015-01-21 11:30:41
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szlylk0105

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议在EDTA去镍之前，用盐酸胍和8M尿素、500mM咪唑先后冲洗，然后用2%的SDS冲洗，接着用5%到25%的酒精梯度冲洗。（当然每两步之间步都要用蒸馏水冲洗）
另建议在使用之前，用500mM的 imidazole冲洗后再使用（柱子颜色会有变化哟）。
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5楼2015-02-10 16:06:13
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