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镍柱重生后与原先颜色不同 已有3人参与
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实验室使用的是散装的Ni-NTA beads（Qiagen），没有重生过的Beads的颜色是“天蓝色”。 使用几次之后，我就进行了beads的重生，重生后呈现“浅绿色”。 但实验室的其他人用相同的方法重生他自己使用后的beads，却可以呈“天蓝色”。  不知道是什么原因，特来询问有经验的人。 重生的方法： （使用后的beads，浸泡在25%酒精里保存，以备重生。） 1） 5倍柱体积（Column Volume，CV）水洗涤。 2） 2倍EDTA洗去Ni。（柱子呈白色，略黄） 3） 5 CV水洗涤。 4） 0.5 M NaOH 洗涤2CV，浸泡30 min. 5) 5 CV水洗涤。 6) 0.1 M NiSO4 洗涤2 CV，浸泡过夜。 7） 5 CV水洗涤。 8) 2 CV 20% 酒精洗涤，并浸泡保存。 我考虑可能的原因有以下这么几个： 1. 纯化蛋白的过程中，使柱子吸附了某种色素，且该色素在上述重生过程中没有除去。（而其他人纯化的蛋白可能不含这种色素） 2. beads使用时间过长（不是新beads）或者保存、使用不当，导致Ni离子螯合能力下降，使beads只能呈现绿色。 那么问题来了， beads螯合能力下降会导致这种颜色的变化吗？不是蓝色变浅，而是变成绿色？ 会不会有其他原因导致这种变化？ 颜色的变化是beads的结合能力的反应吗？ 有没有处理方法使beads变回原来的颜色？ 谢谢，我是新手，请大家不吝赐教！ |
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zhang001zh
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