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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳--突然跑不出带、银染后仅marker有带
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fantuanjuncc

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳--突然跑不出带、银染后仅marker有带 已有4人参与

求助各位啊！！！
我是做甘薯SSR指纹图谱的，实验一直很顺利，结果上周突然跑不出带来!
于是我换了dd水、换了easytaq酶、换了buffer、换了dntp、检测了DNA，都没有问题；在同一个板上跑了现在做的pcr和之前做的pcr，之前的pcr就能染出带；同实验室其他同学做转化的用的同样的东西都能出带。
实在是智商捉急想不出还有什么地方有问题了，拜托大家帮忙啊~~~
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1楼 2016-03-08 23:19:04
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why海生

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做适配体的筛选，模板是80bp的，把东西全换一遍就做出来了。可是1，2周又做不出来了。愁人啊。

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7楼2016-05-11 09:06:02
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ken19860823

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做的不同，PAGE的marker有带肯定不是银染液的问题或者后面的染色操作问题。问题应该就是出在DNA样品这一环节，我做T7EI实验用到的DNA量很少400ng左右。正常PCR切胶回收溶于30ulddh2o浓度在50~150ng左右，所以我们基本切胶回收后跑个带测个浓度就可以往下做了。你的这个指纹的问题，我觉得你可以换下模板，PCR其他条件除了酶和buffer都很难过期的。
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做基因修饰的老菜鸡
2楼2016-03-09 08:46:40
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fantuanjuncc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-09 08:46:40
做的不同，PAGE的marker有带肯定不是银染液的问题或者后面的染色操作问题。问题应该就是出在DNA样品这一环节，我做T7EI实验用到的DNA量很少400ng左右。正常PCR切胶回收溶于30ulddh2o浓度在50~150ng左右，所以我们基 ...

酶和buffer均已换成新的，DNA模板共有1000多个，定期均会重新稀释，应该不会突然全部坏掉。我怀疑是mix的问题，但是mix里面的水、buffer、酶、dntp、引物都是新的，之前也没出过问题，现在突然跑不出pcr了。。不知道还可能是哪里有问题呢？？我感觉自己有点想不到了。。
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3楼2016-03-09 13:26:21
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ken19860823

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by fantuanjuncc at 2016-03-09 13:26:21
酶和buffer均已换成新的，DNA模板共有1000多个，定期均会重新稀释，应该不会突然全部坏掉。我怀疑是mix的问题，但是mix里面的水、buffer、酶、dntp、引物都是新的，之前也没出过问题，现在突然跑不出pcr了。。不知 ...

觉得一切都对的话，就看一下以前正确的实验笔记，或许会有意外收获。
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做基因修饰的老菜鸡
4楼2016-03-09 13:45:58
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