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fantuanjuncc

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳--突然跑不出带、银染后仅marker有带 已有4人参与

求助各位啊!!!
我是做甘薯SSR指纹图谱的,实验一直很顺利,结果上周突然跑不出带来!
于是我换了dd水、换了easytaq酶、换了buffer、换了dntp、检测了DNA,都没有问题;在同一个板上跑了现在做的pcr和之前做的pcr,之前的pcr就能染出带;同实验室其他同学做转化的用的同样的东西都能出带。
实在是智商捉急想不出还有什么地方有问题了,拜托大家帮忙啊~~~
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why海生

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我做适配体的筛选,模板是80bp的,把东西全换一遍就做出来了。可是1,2周又做不出来了。愁人啊。

发自小木虫Android客户端
7楼2016-05-11 09:06:02
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ken19860823

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做的不同,PAGE的marker有带肯定不是银染液的问题或者后面的染色操作问题。问题应该就是出在DNA样品这一环节,我做T7EI实验用到的DNA量很少400ng左右。正常PCR切胶回收溶于30ulddh2o浓度在50~150ng左右,所以我们基本切胶回收后跑个带测个浓度就可以往下做了。你的这个指纹的问题,我觉得你可以换下模板,PCR其他条件除了酶和buffer都很难过期的。
做基因修饰的老菜鸡
2楼2016-03-09 08:46:40
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fantuanjuncc

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-09 08:46:40
做的不同,PAGE的marker有带肯定不是银染液的问题或者后面的染色操作问题。问题应该就是出在DNA样品这一环节,我做T7EI实验用到的DNA量很少400ng左右。正常PCR切胶回收溶于30ulddh2o浓度在50~150ng左右,所以我们基 ...

酶和buffer均已换成新的,DNA模板共有1000多个,定期均会重新稀释,应该不会突然全部坏掉。我怀疑是mix的问题,但是mix里面的水、buffer、酶、dntp、引物都是新的,之前也没出过问题,现在突然跑不出pcr了。。不知道还可能是哪里有问题呢??我感觉自己有点想不到了。。
3楼2016-03-09 13:26:21
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ken19860823

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by fantuanjuncc at 2016-03-09 13:26:21
酶和buffer均已换成新的,DNA模板共有1000多个,定期均会重新稀释,应该不会突然全部坏掉。我怀疑是mix的问题,但是mix里面的水、buffer、酶、dntp、引物都是新的,之前也没出过问题,现在突然跑不出pcr了。。不知 ...

觉得一切都对的话,就看一下以前正确的实验笔记,或许会有意外收获。
做基因修饰的老菜鸡
4楼2016-03-09 13:45:58
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