应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳--突然跑不出带、银染后仅marker有带
51/1返回列表
查看: 1701  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fantuanjuncc

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳--突然跑不出带、银染后仅marker有带 已有4人参与

求助各位啊！！！
我是做甘薯SSR指纹图谱的，实验一直很顺利，结果上周突然跑不出带来!
于是我换了dd水、换了easytaq酶、换了buffer、换了dntp、检测了DNA，都没有问题；在同一个板上跑了现在做的pcr和之前做的pcr，之前的pcr就能染出带；同实验室其他同学做转化的用的同样的东西都能出带。
实在是智商捉急想不出还有什么地方有问题了，拜托大家帮忙啊~~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-03-08 23:19:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

why海生

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做适配体的筛选，模板是80bp的，把东西全换一遍就做出来了。可是1，2周又做不出来了。愁人啊。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-05-11 09:06:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

ken19860823

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做的不同，PAGE的marker有带肯定不是银染液的问题或者后面的染色操作问题。问题应该就是出在DNA样品这一环节，我做T7EI实验用到的DNA量很少400ng左右。正常PCR切胶回收溶于30ulddh2o浓度在50~150ng左右，所以我们基本切胶回收后跑个带测个浓度就可以往下做了。你的这个指纹的问题，我觉得你可以换下模板，PCR其他条件除了酶和buffer都很难过期的。
赞一下(1人) 回复此楼
做基因修饰的老菜鸡
2楼2016-03-09 08:46:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fantuanjuncc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-09 08:46:40
做的不同，PAGE的marker有带肯定不是银染液的问题或者后面的染色操作问题。问题应该就是出在DNA样品这一环节，我做T7EI实验用到的DNA量很少400ng左右。正常PCR切胶回收溶于30ulddh2o浓度在50~150ng左右，所以我们基 ...

酶和buffer均已换成新的，DNA模板共有1000多个，定期均会重新稀释，应该不会突然全部坏掉。我怀疑是mix的问题，但是mix里面的水、buffer、酶、dntp、引物都是新的，之前也没出过问题，现在突然跑不出pcr了。。不知道还可能是哪里有问题呢？？我感觉自己有点想不到了。。
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-09 13:26:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ken19860823

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by fantuanjuncc at 2016-03-09 13:26:21
酶和buffer均已换成新的，DNA模板共有1000多个，定期均会重新稀释，应该不会突然全部坏掉。我怀疑是mix的问题，但是mix里面的水、buffer、酶、dntp、引物都是新的，之前也没出过问题，现在突然跑不出pcr了。。不知 ...

觉得一切都对的话，就看一下以前正确的实验笔记，或许会有意外收获。
赞一下 回复此楼
做基因修饰的老菜鸡
4楼2016-03-09 13:45:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +7 NIFFFfff 2026-03-20 7/350 2026-03-26 20:45 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +5 kongweilin 2026-03-26 7/350 2026-03-26 14:37 by mapenggao
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 277分求调剂，跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭