24小时热门版块排行榜    

查看: 1810  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fantuanjuncc

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳--突然跑不出带、银染后仅marker有带 已有4人参与

求助各位啊!!!
我是做甘薯SSR指纹图谱的,实验一直很顺利,结果上周突然跑不出带来!
于是我换了dd水、换了easytaq酶、换了buffer、换了dntp、检测了DNA,都没有问题;在同一个板上跑了现在做的pcr和之前做的pcr,之前的pcr就能染出带;同实验室其他同学做转化的用的同样的东西都能出带。
实在是智商捉急想不出还有什么地方有问题了,拜托大家帮忙啊~~~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fantuanjuncc

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-09 08:46:40
做的不同,PAGE的marker有带肯定不是银染液的问题或者后面的染色操作问题。问题应该就是出在DNA样品这一环节,我做T7EI实验用到的DNA量很少400ng左右。正常PCR切胶回收溶于30ulddh2o浓度在50~150ng左右,所以我们基 ...

酶和buffer均已换成新的,DNA模板共有1000多个,定期均会重新稀释,应该不会突然全部坏掉。我怀疑是mix的问题,但是mix里面的水、buffer、酶、dntp、引物都是新的,之前也没出过问题,现在突然跑不出pcr了。。不知道还可能是哪里有问题呢??我感觉自己有点想不到了。。
3楼2016-03-09 13:26:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

ken19860823

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做的不同,PAGE的marker有带肯定不是银染液的问题或者后面的染色操作问题。问题应该就是出在DNA样品这一环节,我做T7EI实验用到的DNA量很少400ng左右。正常PCR切胶回收溶于30ulddh2o浓度在50~150ng左右,所以我们基本切胶回收后跑个带测个浓度就可以往下做了。你的这个指纹的问题,我觉得你可以换下模板,PCR其他条件除了酶和buffer都很难过期的。
做基因修饰的老菜鸡
2楼2016-03-09 08:46:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ken19860823

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by fantuanjuncc at 2016-03-09 13:26:21
酶和buffer均已换成新的,DNA模板共有1000多个,定期均会重新稀释,应该不会突然全部坏掉。我怀疑是mix的问题,但是mix里面的水、buffer、酶、dntp、引物都是新的,之前也没出过问题,现在突然跑不出pcr了。。不知 ...

觉得一切都对的话,就看一下以前正确的实验笔记,或许会有意外收获。
做基因修饰的老菜鸡
4楼2016-03-09 13:45:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangjiao302

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是做甘薯SSR标记的,我做的遗传多样性分析,想请教一下,你知道出来的条带怎么记数吗?

发自小木虫Android客户端
5楼2016-03-20 08:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 23/1150 2026-08-13 00:35 by 要乐观耀哥
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
请填处理意见