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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做qRT-PCR的RNA样品反转录之前需要稀释到相同浓度吗？why？
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fengyuran

新虫 (正式写手)

[求助] 做qRT-PCR的RNA样品反转录之前需要稀释到相同浓度吗？why？ 已有3人参与

如题目，谢谢啦！

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1楼 2016-03-08 13:32:50
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
需要，模板一样的时候反转录效率才是最相近的，反转后的cDNA量一样的时候做PCR才能更好的用起峰时间来表示模板基因的含量。
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2楼2016-03-08 14:41:28
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普通回帖

youyou德华

金虫 (小有名气)
最好是在你的反转录体系中就调整，保证总量一致，结果会很好。

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3楼2016-03-08 16:06:00
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
需要，通常使用试剂盒进行反转录时需要调整RNA的总量一致，这样反转录效率一致，得到的cDNA的量才相近，不然你就得一遍一遍的标模板，使cDNA量一致。
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fengyuran
4楼2016-03-08 16:27:02
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fengyuran

新虫 (正式写手)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-08 16:27:02
需要，通常使用试剂盒进行反转录时需要调整RNA的总量一致，这样反转录效率一致，得到的cDNA的量才相近，不然你就得一遍一遍的标模板，使cDNA量一致。

什么叫一遍一遍标模版？ 如果送出去做qPCR是不是公司就给调了？送的是cDNA。 非常感谢

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5楼2016-03-08 21:58:14
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
差不多一样多就好，适用于相对定量。绝对定量另外

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6楼2016-03-08 22:37:04
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
预跑一个样，然后调整模板到量差不多。不一定要完全一样浓度，LZ应该需要知道内参的作用！

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fengyuran
7楼2016-03-08 22:54:07
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fengyuran

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by Bioexperixgs at 2016-03-08 22:54:07
预跑一个样，然后调整模板到量差不多。不一定要完全一样浓度，LZ应该需要知道内参的作用！

好 我好好学习一下

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8楼2016-03-09 07:55:33
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Bioexperixgs at 2016-03-08 22:54:07
预跑一个样，然后调整模板到量差不多。不一定要完全一样浓度，LZ应该需要知道内参的作用！

如果rna浓度相差很大的话，有的甚至只需要零点几微升，有的需要几微升
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
9楼2016-03-09 11:11:50
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mlxmiao at 2016-03-08 22:37:04
差不多一样多就好，适用于相对定量。绝对定量另外

如果rna加多了，会不会有什么影响
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
10楼2016-03-09 11:14:27
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