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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 构建3k多bp的载体
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elina_zj

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建3k多bp的载体 已有1人参与

求助！最近要构建一个加flag标签的3000多bp的载体，还有酵母双杂载体，求大牛们指教，构了两次没有成功。
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1楼 2016-03-06 14:33:21
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by elina_zj at 2016-03-06 20:54:28
不知道具体问题出现在哪里，我是直接连载目的载体上，连接不上～
...

意思就是你从开始的构建过程，目的片段来源，如何获得，怎么处理和载体连接，等等

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-03-06 21:34:46
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
问题还是不太清楚，具体问题出在哪里，构建过程怎样？

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-03-06 19:50:28
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elina_zj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-06 19:50:28
问题还是不太清楚，具体问题出在哪里，构建过程怎样？

不知道具体问题出现在哪里，我是直接连载目的载体上，连接不上～

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3楼2016-03-06 20:54:28
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elina_zj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-06 21:34:46
意思就是你从开始的构建过程，目的片段来源，如何获得，怎么处理和载体连接，等等
...

模版来源是双分子荧光的载体，稀释了扩PCR，多扩了几管，回收酶切完用的切胶回收，连接用15ul体系～能否告知下平时都需要注意的问题

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5楼2016-03-06 23:12:46
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