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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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小胖芙芙

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助!!短片段(169 bp)PCR扩增,用Takara La Taq酶,不出条带呀。。。。 已有5人参与

小白第一次发帖,各位大神见谅。。。。
以前用普通的2×Taq PCR Mix扩增,它含的酶是Taq DNA Polymerase,扩增条带是169 bp,当时可以出条带,亮度可以。也送测了的,返回结果有的位点是双峰。
因为提的DNA是混合物,现在想做克隆看看混合物的成分,就换成了Takara的La taq,但是不出条带了呀。。。引物没变,PCR条件也没变。。。。
我的条件是这样的:
(1)94℃ 5min
(2)94℃ 30s
(3)51 ℃ 30s
(4)72℃ 45s
(5)(2)-(4)39
(6)72℃ 10min
(7)4℃ forever
求各位大神帮帮忙,看看有没有啥问题啊。。。。
有啥没说到的,各位大神尽管问。。。。。
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小胖芙芙

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2016-03-06 08:46:12
片段那么短,就用那个mix也行,保真性一般也行了,多送一两个测序就好了。La Taq不是用于长片段的吗(我忘了)。还有你的延伸时间可以缩短,有20s足够了,补充延伸也要缩短,40个循环是不是太多了。

开始想的是用LA就可以不用单独加A尾了,它确实是扩长的,以前用它扩过500bp的片段是没有问题的。循环数我也试着降一下吧,谢谢。。

发自小木虫Android客户端
10楼2016-03-06 10:16:41
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查看全部 21 个回答

dragonhmw

铁杆木虫 (正式写手)

不应该啊,溶液体系是什么?

发自小木虫Android客户端
2楼2016-03-06 07:24:03
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fudan671

木虫 (著名写手)

重新摸索条件,怀疑da降解

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-03-06 07:43:36
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yilberg

新虫 (小有名气)

4楼2016-03-06 08:38:41
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