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吕木木新虫 (小有名气)
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PCR程序 已有2人参与
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我要克隆1900bp的片段，用的GXL酶，反应体系是：模板1微升，5×GXL Buffer5微升，MIXdNTP 2微升，引物1微升，酶0.5微升，ddH2O至25微升。 对应程序：94℃30 s，72℃ 2 min，5 个循环；94℃ 30 s，（温度梯度）70℃ 40 s， 72℃ 2 min，5 个循环；94℃ 30 s，（温度梯度）68℃ 40 s，72℃ 2 min，30 个循环；72℃ 10 min，4℃保存，但是一直跑不出来，什么条带都没有，跑了一个学期了，请问怎么修改程序或体系，温度梯度怎么设置？ |
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2楼2016-03-05 21:22:16
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sandycool
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6楼2016-03-05 22:11:05
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7楼2016-03-05 22:12:00
sandycool
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8楼2016-03-05 22:17:16
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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不要盲目相信前辈啦，基因不一样的话，如果长度不一样，延伸时间就不一样，退火温度也不同，问题还可能出现在引物上，我觉得你可以看看酶的说明书，按上面的来。 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2016-03-05 22:29:59
吕木木
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10楼2016-03-05 22:42:59