| 查看: 1269 | 回复: 17 | ||
吕木木新虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR程序已有2人参与
|
|
我要克隆1900bp的片段，用的GXL酶，反应体系是：模板1微升，5×GXL Buffer5微升，MIXdNTP 2微升，引物1微升，酶0.5微升，ddH2O至25微升。 对应程序：94℃30 s，72℃ 2 min，5 个循环；94℃ 30 s，（温度梯度）70℃ 40 s， 72℃ 2 min，5 个循环；94℃ 30 s，（温度梯度）68℃ 40 s，72℃ 2 min，30 个循环；72℃ 10 min，4℃保存，但是一直跑不出来，什么条带都没有，跑了一个学期了，请问怎么修改程序或体系，温度梯度怎么设置？ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有124人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
2楼2016-03-05 21:22:16
sandycool
铁虫 (正式写手)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 4845.6
- 散金: 55
- 红花: 1
- 帖子: 324
- 在线: 71.1小时
- 虫号: 2481681
- 注册: 2013-05-25
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2016-03-05 21:58:48
sandycool
铁虫 (正式写手)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 4845.6
- 散金: 55
- 红花: 1
- 帖子: 324
- 在线: 71.1小时
- 虫号: 2481681
- 注册: 2013-05-25
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2016-03-05 22:01:27
吕木木
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 95.5
- 散金: 28
- 帖子: 53
- 在线: 9.9小时
- 虫号: 4115673
- 注册: 2015-10-02
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2016-03-05 22:10:19
吕木木
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 95.5
- 散金: 28
- 帖子: 53
- 在线: 9.9小时
- 虫号: 4115673
- 注册: 2015-10-02
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2016-03-05 22:11:05
吕木木
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 95.5
- 散金: 28
- 帖子: 53
- 在线: 9.9小时
- 虫号: 4115673
- 注册: 2015-10-02
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
7楼2016-03-05 22:12:00
sandycool
铁虫 (正式写手)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 4845.6
- 散金: 55
- 红花: 1
- 帖子: 324
- 在线: 71.1小时
- 虫号: 2481681
- 注册: 2013-05-25
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2016-03-05 22:17:16
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
不要盲目相信前辈啦，基因不一样的话，如果长度不一样，延伸时间就不一样，退火温度也不同，问题还可能出现在引物上，我觉得你可以看看酶的说明书，按上面的来。 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2016-03-05 22:29:59
吕木木
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 95.5
- 散金: 28
- 帖子: 53
- 在线: 9.9小时
- 虫号: 4115673
- 注册: 2015-10-02
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
10楼2016-03-05 22:42:59