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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这是touchdown加梯度，从72°降到了68°+-，这要看你的引物Tm值有多大了，适不适合用这个程序。有必要touchdown加梯度吗，刚开始还是一步一步来好，
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11楼2016-03-06 08:52:20
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吕木木

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sandycool at 2016-03-05 22:17:16
请问是takara的哪一款？有一个除基因组DNA的，有一个是1st strand synthesis，具体是哪一款？谢谢
...

应该是第二种

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12楼2016-03-06 12:56:24
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sandycool

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 吕木木 at 2016-03-06 12:56:24
应该是第二种
...

嗯嗯，谢谢！

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13楼2016-03-06 13:13:58
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吕木木

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2016-03-06 08:52:20
你这是touchdown加梯度，从72°降到了68°+-，这要看你的引物Tm值有多大了，适不适合用这个程序。有必要touchdown加梯度吗，刚开始还是一步一步来好，

怎么一步步来啊，求指点

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14楼2016-03-06 13:15:04
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 吕木木 at 2016-03-06 13:15:04
怎么一步步来啊，求指点
...

先摸个梯度，看看你的引物退火温度是多少，P的怎么样，如果不太好，再依照这个退火温度设计touchdown的程序。
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15楼2016-03-06 13:27:05
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吕木木

新虫 (小有名气)
恩我也是一直在做温度梯度，一直没跑出来，不知道怎么回事，最近重提RNA，跑内参一直跑不出来，RNA没问题，而且用以前跑出来的样做对照都没跑出来，引物二聚体都没有，引物，试剂都换了结果都一样，不知道问题出在哪

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16楼2016-03-06 13:38:45
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Sunshine092

木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 吕木木 at 2016-03-06 13:38:45
恩我也是一直在做温度梯度，一直没跑出来，不知道怎么回事，最近重提RNA，跑内参一直跑不出来，RNA没问题，而且用以前跑出来的样做对照都没跑出来，引物二聚体都没有，引物，试剂都换了结果都一样，不知道问题出在哪 ...

如果跑内参都跑不出来的话，可以考虑换个人试试。。。你就看着别人完整地做一遍。。。
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17楼2016-03-08 17:16:51
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sunshenmei

铁虫 (初入文坛)
引物没有问题吗

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18楼2018-10-13 19:54:09
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