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吕木木

新虫 (小有名气)

[求助] PCR程序 已有2人参与

我要克隆1900bp的片段,用的GXL酶,反应体系是:模板1微升,5×GXL Buffer5微升,MIXdNTP 2微升,引物1微升,酶0.5微升,ddH2O至25微升。
对应程序:94℃30 s,72℃ 2 min,5 个循环;94℃ 30 s,(温度梯度)70℃ 40 s,
72℃ 2 min,5 个循环;94℃ 30 s,(温度梯度)68℃ 40 s,72℃ 2
min,30 个循环;72℃ 10 min,4℃保存,但是一直跑不出来,什么条带都没有,跑了一个学期了,请问怎么修改程序或体系,温度梯度怎么设置?
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吕木木

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sandycool at 2016-03-05 21:58:48
你好,请问一下,你的反转录用的哪个试剂盒?

塔克拉的

发自小木虫Android客户端
5楼2016-03-05 22:10:19
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查看全部 18 个回答

gnot_nail

金虫 (正式写手)

这条件是按说明书来的吗?为啥会有5个循环……

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-03-05 21:22:16
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sandycool

铁虫 (正式写手)

你好,请问一下,你的反转录用的哪个试剂盒?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-03-05 21:58:48
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sandycool

铁虫 (正式写手)

现在有takara的两个反转录试剂盒,一个是primescript 1st cDNA 试剂盒,另外一个是去除gDNA的试剂盒,不知道用哪个更好

发自小木虫Android客户端
4楼2016-03-05 22:01:27
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