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木虫 (小有名气)

[求助] 可不可以把两个质粒导入同一个菌株？已有1人参与

之前做过把两个不同的质粒同时转化，现在想把同一个质粒，比如pet28，但是连了两个不同的片段的两个质粒，同时转化。感觉应该也是可以的，但是具体能不能表达，或者对彼此有没有影响，也不清楚。可以这样吗？

天道酬勤

1楼2016-03-04 13:24:19

铁虫 (小有名气)

感谢参与，应助指数 +1

看看质粒的复制子，pET28a和pET32a都是f1复制子就不行。当然如果抗性不一样也是可以共存的但是很不稳定，互相影响。比如pET28a和pUC19就可以共存，后者是pBR322复制子。
如果要表达两个基因可以连接到pETDuet这种有两个多克隆位点的质粒

4楼2016-03-05 16:50:10

木虫 (著名写手)

这个首先两个质粒用的相同载体本身筛选克隆就比较麻烦，我们之前都是一个用28卡那抗，和另一种抗的，比如32氨苄抗的，对于会不会影响表达，和你的蛋白是有关系的，建议选择不同抗的载体进行同宿主表达，比较大肠表达构建周期还是比较短的，可以试试！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！

2楼2016-03-04 19:06:10

捐助贵宾 (职业作家)

28和32不行同时共存，复制起点相互干扰

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3楼2016-03-04 19:19:21