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小鼹鼠

木虫 (小有名气)

[求助] 可不可以把两个质粒导入同一个菌株? 已有1人参与

之前做过把两个不同的质粒同时转化,现在想把同一个质粒,比如pet28,但是连了两个不同的片段的两个质粒,同时转化。感觉应该也是可以的,但是具体能不能表达,或者对彼此有没有影响,也不清楚。可以这样吗?
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天道酬勤
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原海亮

木虫 (著名写手)

这个首先两个质粒用的相同载体本身筛选克隆就比较麻烦,我们之前都是一个用28卡那抗,和另一种抗的,比如32氨苄抗的,对于会不会影响表达,和你的蛋白是有关系的,建议选择不同抗的载体进行同宿主表达,比较大肠表达构建周期还是比较短的,可以试试!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-03-04 19:06:10
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


28和32不行同时共存,复制起点相互干扰

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3楼2016-03-04 19:19:21
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noblefire

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看看质粒的复制子,pET28a和pET32a都是f1复制子就不行。当然如果抗性不一样也是可以共存的但是很不稳定,互相影响。比如pET28a和pUC19就可以共存,后者是pBR322复制子。
如果要表达两个基因可以连接到pETDuet这种有两个多克隆位点的质粒
4楼2016-03-05 16:50:10
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