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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » EMSA问题请教
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竹林樱草

新虫 (小有名气)

[求助] EMSA问题请教

大家好，最近在做EMSA实验，目的是想得到不同化合物作用于蛋白后，对DNA的结合能力的差异，但是做了几次，要不就是没差异，要不就是没有结合的DNA条带，大神们我该如何改进实验呢？游离的DNA和结合的DNA转膜时间会不会又区别呢？请高手赐教！不胜感激
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1楼 2016-03-03 20:54:47
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jackyoung

新虫 (正式写手)
主要是调节两者input的量和比例，EMSA想曝光个漂亮片子不容易。转膜时间没有影响

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CestLaVie
2楼2016-03-04 00:15:45
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竹林樱草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jackyoung at 2016-03-04 00:15:45
主要是调节两者input的量和比例，EMSA想曝光个漂亮片子不容易。转膜时间没有影响

但是我调整比例，也就是蛋白的量足够多的情况下，游离的DNA还是有很多，结合的DNA却没有梯度显示
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3楼2016-03-04 10:54:10
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jackyoung

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 竹林樱草 at 2016-03-04 10:54:10
但是我调整比例，也就是蛋白的量足够多的情况下，游离的DNA还是有很多，结合的DNA却没有梯度显示...

说的是比例，两个都得调，要不背景太高看不出来。

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

竹林樱草
CestLaVie
4楼2016-03-04 21:18:33
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竹林樱草

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by jackyoung at 2016-03-04 21:18:33
说的是比例，两个都得调，要不背景太高看不出来。
...

好的，谢谢啦
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5楼2016-03-05 15:33:22
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以接这类实验

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6楼2016-03-05 15:38:42
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竹林樱草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by star013 at 2016-03-05 15:38:42
我们可以接这类实验

你们是做这方面的吗？
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7楼2016-03-08 21:15:52
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star013

新虫 (知名作家)
对的，我们做了很多这种实验了

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8楼2016-03-09 09:30:22
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huangqi2016

新虫 (小有名气)
如何控制好曝光时间呢？

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9楼2016-03-13 11:19:02
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竹林樱草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by huangqi2016 at 2016-03-13 11:19:02
如何控制好曝光时间呢？

曝光时间也是试出来的，先曝光20s、30s、1min，多试几个就可以啦
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10楼2016-03-26 11:55:56
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