24小时热门版块排行榜    

查看: 4810  |  回复: 7

z631535213

木虫 (正式写手)

[求助] 请问下PCR过程中设置两个复性温度是什么意思 已有2人参与

楼在一篇产品资料里看到其在进行PCR过程中,复性温度设置了两个:
比如
        98℃ 10min,
        95℃ 10sec,50℃ 90sec, 72℃ 30sec       —— 10 cycles
        95℃ 10sec,55℃ 90sec, 72℃ 30sec       —— 30 cycles
        72℃  5min
        4℃ Hold


我猜想设置了两个复性温度50℃,55℃,较低的50℃是为了放大初始模版量(哪怕可能产生非特异性扩增),较高的55℃是避免非特异性扩增时所采取的正常PCR温度

想请假下各位,是这样的吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
z631535213: 金币+5, 有帮助 2016-03-02 07:50:33
我的观点与楼主一样,有点类似TD-PCR。
2楼2016-03-01 21:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-03-01 21:14:49
我的观点与楼主一样,有点类似TD-PCR。

多谢。俺去了解下TD PCR

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-03-02 07:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

williamwjj

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
touchdown pcr更理想一些

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-03-02 08:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by williamwjj at 2016-03-02 08:13:50
touchdown pcr更理想一些

嗯,感觉最近做的PCR可以去试一试TD PCR。

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-03-02 08:23:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柚子小姐lu

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-03-01 21:14:49
我的观点与楼主一样,有点类似TD-PCR。

请问TD-PCR两次的退火温度应该怎么选择呢? 最近做的荧光定量PCR实验引物出现了严重的非特异性杂交,退火温度设定的37℃,引物的理论Tm值大约在54℃。请问这种方法有用吗,是因为设定的退火温度太低了吗才出现非特异性杂交?求指教
6楼2016-03-18 23:26:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 柚子小姐lu at 2016-03-18 23:26:05
请问TD-PCR两次的退火温度应该怎么选择呢? 最近做的荧光定量PCR实验引物出现了严重的非特异性杂交,退火温度设定的37℃,引物的理论Tm值大约在54℃。请问这种方法有用吗,是因为设定的退火温度太低了吗才出现非特 ...

退火温度设高了,特异性好但扩增效率不好;温度设低了,扩增效率好但特异性不好。这是俺对退火温度的理解

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-03-19 06:43:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z631535213

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 柚子小姐lu at 2016-03-18 23:26:05
请问TD-PCR两次的退火温度应该怎么选择呢? 最近做的荧光定量PCR实验引物出现了严重的非特异性杂交,退火温度设定的37℃,引物的理论Tm值大约在54℃。请问这种方法有用吗,是因为设定的退火温度太低了吗才出现非特 ...

一般退火温度是在引物tm值正负5度吧,不会低到37度的。资料上说,相差一度,扩增效率有4倍的差异,所以可以从理论tm值便扩增边降低退火温度

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-03-19 06:47:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 z631535213 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 7/350 2026-08-15 09:09 by 4wMiSEwB6436
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +24 医学老男孩 2026-08-13 50/2500 2026-08-15 06:38 by 学员8dgXkO
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
信息提示
请填处理意见