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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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蛇精病范

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助。急!为什么酶切鉴定时载体位置大小不对? 已有2人参与

求助,急!!!我的目的片段是从T载上切下来胶回收的(1000bp),载体是从重组质粒上切下来胶回收的(4900bp),可以肯定胶回收时没有切错片段,连接后PCR鉴定正确,抽质粒酶切发现目的片段大小正确,但是载体片段只有2500左右,与T载大小相似,连接后转化时有DH5α空转对照,不会是污染问题。想请教一下各位大神,知道这是什么情况吗?
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jackyoung

新虫 (正式写手)

载体上有限制酶切点,回头查查序列分析下就好了。

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
2楼2016-03-02 08:40:11
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轩辕漪

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

3楼2016-03-03 05:19:51
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

质粒酶切往往是不彻底的,切胶的时候有可能污染载体的,即使2条带相隔很远还是有可能污染。
4楼2016-03-05 09:44:31
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蛇精病范

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jackyoung at 2016-03-02 08:40:11
载体上有限制酶切点,回头查查序列分析下就好了。

除了多克隆位点外,载体其他地方还会有相同的酶切位点吗?这个应该不会吧
5楼2016-03-10 10:48:14
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wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

转化后菌落生长情况,很有可能就是T载体啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2016-03-10 11:39:17
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