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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助。急！为什么酶切鉴定时载体位置大小不对？
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蛇精病范

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助。急！为什么酶切鉴定时载体位置大小不对？ 已有2人参与

求助，急！！！我的目的片段是从T载上切下来胶回收的（1000bp），载体是从重组质粒上切下来胶回收的（4900bp），可以肯定胶回收时没有切错片段，连接后PCR鉴定正确，抽质粒酶切发现目的片段大小正确，但是载体片段只有2500左右，与T载大小相似，连接后转化时有DH5α空转对照，不会是污染问题。想请教一下各位大神，知道这是什么情况吗？
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1楼 2016-03-01 15:26:08
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jackyoung

新虫 (正式写手)
载体上有限制酶切点，回头查查序列分析下就好了。

发自小木虫Android客户端
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CestLaVie
2楼2016-03-02 08:40:11
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轩辕漪

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2016-03-03 05:19:51
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

质粒酶切往往是不彻底的，切胶的时候有可能污染载体的，即使2条带相隔很远还是有可能污染。
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4楼2016-03-05 09:44:31
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蛇精病范

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jackyoung at 2016-03-02 08:40:11
载体上有限制酶切点，回头查查序列分析下就好了。

除了多克隆位点外，载体其他地方还会有相同的酶切位点吗？这个应该不会吧
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5楼2016-03-10 10:48:14
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wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

转化后菌落生长情况，很有可能就是T载体啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2016-03-10 11:39:17
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