| 查看: 968 | 回复: 7 | |||
[交流]
连接转化
|
|
和PMD-19T载体连接 体系10 载体1 pcr产物4solution 1 5，4度连接过夜，然后转化到DH5 中，一天内都没有长菌，做了好几次，怀疑是不是连接中有问题，转化后的菌液为模版做了pcr鉴定，没有目的条带，请大家指点 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有293人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
有可能是载体或者（和）片段都没有处理好，重新制备载体或者（和）片段，应该就好了。另外，载体多加些，换用16℃过夜链接，以前我都是这么做的 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-01 09:38:12
3楼2016-03-01 13:39:52
mlxmiao
木虫 (著名写手)
- 应助: 46 (小学生)
- 金币: 7174.3
- 散金: 4871
- 红花: 15
- 帖子: 2883
- 在线: 311.8小时
- 虫号: 127413
- 注册: 2005-12-08
- 专业: 园艺学与植物营养学
4楼2016-03-01 14:32:34
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
首先楼主PCR扩增选用的酶可以末端加A么？如果可以，那么最好对PCR产物浓度跑胶看看，同时转化做感受态阴性对照，即不加连接产物的，看感受态是否有问题。如果不可以末端加A，楼主应该对PCR产物进行加A反应后，再同T载体连接。祝好 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-03-01 14:33:28
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
TA克隆一般不会出现这种情况，片段浓度要高些。如果片段制备不是很麻烦的话，建议你重新做片段？另，片段大小多少？片段大的话，连上的可能会低些 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-03-01 16:59:03
7楼2016-03-01 17:58:49
8楼2016-03-02 11:01:04
100