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连接转化
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和PMD-19T载体连接 体系10 载体1 pcr产物4solution 1 5，4度连接过夜，然后转化到DH5 中，一天内都没有长菌，做了好几次，怀疑是不是连接中有问题，转化后的菌液为模版做了pcr鉴定，没有目的条带，请大家指点 发自小木虫IOS客户端 |
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有可能是载体或者（和）片段都没有处理好，重新制备载体或者（和）片段，应该就好了。另外，载体多加些，换用16℃过夜链接，以前我都是这么做的 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-01 09:38:12
3楼2016-03-01 13:39:52
mlxmiao
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4楼2016-03-01 14:32:34
原海亮
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首先楼主PCR扩增选用的酶可以末端加A么？如果可以，那么最好对PCR产物浓度跑胶看看，同时转化做感受态阴性对照，即不加连接产物的，看感受态是否有问题。如果不可以末端加A，楼主应该对PCR产物进行加A反应后，再同T载体连接。祝好 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-03-01 14:33:28
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TA克隆一般不会出现这种情况，片段浓度要高些。如果片段制备不是很麻烦的话，建议你重新做片段？另，片段大小多少？片段大的话，连上的可能会低些 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-03-01 16:59:03
7楼2016-03-01 17:58:49
8楼2016-03-02 11:01:04