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G号糖木虫 (正式写手)
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请教pcr电泳方面问题 已有1人参与
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最近做了一般pcr，结果电泳图感觉不行，想请教分析哈原因。如图，基因扩增片段大概1000bp,所以最下方是什么条带？怎么避免呢 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2016-02-27 16:55:18
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The bands less than 100bp in size were primer dimers or RNA contaminations. When you extract DNA, treat the pellets with TE containing RNaseA at 37 degrees Celsius for 1 hour. When you amplify the target genes, use less primers and higher annealing temperature. By the way, set the positive and negetive controls on every experiment, which is really helpful to find out the carrier. 发自小木虫IOS客户端 |
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G号糖3楼2016-02-27 19:08:46
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5楼2016-02-28 13:21:16
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6楼2016-03-01 03:52:23
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首先，最下方的是二聚体，PCR常见的问题，因为用酶不当，酶的特异性灵敏度不高，配置体系虽然在冰上也难以避免产生二聚体（可以用热启动Taq酶，可以先了解一下原理） 其次，胶浓度是多少，marker好像没有分离开，， 最后，你的目的片段出来了吗。。。应该没有出来吧，上方最亮的那条带应该不是目的条带 吧，，，， PCR标准操作流程： http://www.detaibio.com/topics/pcr-sop.html 热启动Taq酶的原理： http://wenku.baidu.com/link?url=MdqQTlGAtQFbBE3HCutlKDyS_iNwkJkMLeiIheIMFjVGuMGxE_sykvWv9zNYSAHtZmOt_kWuxFIMe6hjfoEt6D60-TBn_KAEF2NJnh03ORK |
7楼2016-03-09 09:09:14