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水石孤人

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 45.5
帖子: 7
在线: 3.2小时
虫号: 4322176
注册: 2015-12-30
专业: 微生物遗传育种学

[求助] G+细菌提取基因组，拖带，260/280一直在2.00。求指教

原来发帖要金币，我还去领了两个才够发个帖子。而且不知道怎么给，同时也请指导！

1.破壁：液氮研磨，溶菌酶处理过夜都用过。+600μL裂解液。
2.+20μLRNase(10毫克每毫升)，37℃，30min。
3.140μL 5M Nacl，4℃，5min。
4.12000rpm,4℃，10min。
5.+等体积苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），充分混匀，静置5min。
6.12000rpm,4℃，10min。
重复5、6直至抽提界面无沉淀。
7.+等体积氯仿，12000rpm,4℃，10min。
8.+2倍体积无水乙醇，-20摄氏度，过夜。
9.12000rpm,4℃，10min。吸干残留液体。
10.75%乙醇洗涤两次，吸干残留液体。
11.吹干。
12.TE缓冲液溶解。
13.0.8%凝胶电泳，80V。

1号泳道：Marker 2K plus。6号泳道：Marker HindⅢ

问题：①一直有拖带。
②260/280一直都在2.0左右，胶图下面RNA部分很亮。

20160225.png

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