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水石孤人

新虫 (初入文坛)

[求助] G+细菌提取基因组,拖带,260/280一直在2.00。求指教

原来发帖要金币,我还去领了两个才够发个帖子。而且不知道怎么给,同时也请指导!

1.破壁:液氮研磨,溶菌酶处理过夜都用过。+600μL裂解液。
2.+20μLRNase(10毫克每毫升),37℃,30min。
3.140μL 5M Nacl,4℃,5min。
4.12000rpm,4℃,10min。
5.+等体积苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),充分混匀,静置5min。
6.12000rpm,4℃,10min。
    重复5、6直至抽提界面无沉淀。
7.+等体积氯仿,12000rpm,4℃,10min。
8.+2倍体积无水乙醇,-20摄氏度,过夜。
9.12000rpm,4℃,10min。吸干残留液体。
10.75%乙醇洗涤两次,吸干残留液体。
11.吹干。
12.TE缓冲液溶解。
13.0.8%凝胶电泳,80V。

1号泳道 :Marker 2K plus。6号泳道:Marker HindⅢ

问题:①一直有拖带。
           ②260/280一直都在2.0左右,胶图下面RNA部分很亮。

G+细菌提取基因组,拖带,260/280一直在2.00。求指教
20160225.png
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fudan671

木虫 (著名写手)

3楼2016-02-27 07:32:19
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铜豌豆壮壮

铁虫 (初入文坛)

2楼2016-02-27 00:50:49
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水石孤人

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fudan671 at 2016-02-27 07:32:19
加入rna酶

我在第二步加了
4楼2016-02-27 08:41:19
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