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霜落雪

铁虫 (初入文坛)

[求助] pET-32a表达出来的融合蛋白肠激酶切割后如何分离 已有1人参与

pET-32a表达出来的融合蛋白想要去除Trx.Tag、His.Tag和S.Tag,用肠激酶切割后如何分离呢,原本纯化蛋白是用的是组氨酸标签,这回两个部分都有组氨酸标签了
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kitten1983aw

新虫 (小有名气)

用pet 29b 直接连His tag,然后酶切,过Ni柱 即可。
4楼2016-02-29 14:36:43
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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霜落雪: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2016-02-26 10:32:32
为什么两个部分都有HIS标签呢?难道保留了C端标签?不知道你这样构建是否是有特殊需要,不然酶切后直接过个Ni柱就行了。现在这情况你试试过个离子交换或者分子筛什么的试试,看能不能将标签和蛋白分开
2楼2016-02-26 09:05:38
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