QPCR单峰、后面发现模板有基因组污染，查了下引物，上下游都没有跨外显子，但是扩的条带中间夹了内含子（900...这样子的话如果基因组被扩出来那么条带大小就会不一样、那是不是就会出现双峰？...

在做qPCR加标回收率那里卡壳了，试了很多种试剂盒，算出来数据...泡菜水用试剂盒方法提DNA，一组加目标菌质粒，一组不加→跑qpcr→用ct值带回标准曲线算浓度→两组浓度差值除以理论质粒浓度...

现在要做在组织中用qPCR检测lncRNA的表达，引物是参照文献上给的，但是在ncbi里面blast出来产物是200多bp,用产物跑胶出来也是200...cDNA，而lncRNA是非编码RNA,是不是不能按照普通的逆转录来做...

产物跑胶发现高浓度的可以看到，（当然跑胶可能不是很敏感）5、最后一张图的荧光值全是负的，而且负的那么大，又是什么鬼~引物已经试过两种，都差不多的结果~再做不出来，要疯啦~...

以前我们这RNA都不跑胶的，觉得没必要，就测下OD260的值，有值就可可以。现在我知道了，原来降解的RNA也有OD260值的。RNA降解了...我当时十几个老鼠都杀完后，把取出来的心脏一起冻到-70℃的。...

跑了几天了换了模板，阴物，还是跑成这样，以前用这个引物很正常，这到底是什么问题

第一次用SYBRGreen方法做qPCR，我用的是ABI7900HT仪器，一...2.4软件分析结果出来后看不了熔解曲线，软件里显示灰色，点不开，麻烦各位帮我分析一下，问题到底出在哪里，怎么查看熔解曲线呀

发生了很诡异的结果，就是我的目的基因都P出来，并且重现性和复孔之间的差距都很小，但是内参基因GAPDH确很不稳定，复孔之间会...跑胶的结果是12和4的复孔的亮度没什么区别，你觉得可能是什么...

做chip做了两个多月了,用RNApolymeraseII抗体做阳参，结果检测chip-qPCR检测GAPDH，老是跑不出来，大神们能帮我分析一下原因吗？跪求

我做的是普通PCR，目的片段是1500bp，但是一直跑不出来，想找个内参看看到底是引物的问题，还是模版及PCR的问题，我看网上都是qPCR的内参引物，最后扩出来都是几百，我想找个扩出来大小也是...

我有五个基因，如果我用一个模板这样去做qpcr。我不太懂溶解曲线和扩增曲线的原理。所以我是每次做一个基因，跑一次能同时得到...我不知道溶解曲线和扩增曲线是分别跑出来的还是一次跑出来的。...

有一个疑问，既然目的基因和内参都到了平台期，为什么跑出来的条带不一样亮，我跑了39个循环，内参15个循环到达指数期，目的基因25个循环到达指数期，但是他们都在39个循环之前到达了平台期...

如图中所示，做几个文库对HEV基因是否表达的分析，跑出来的QPCR曲线呈现如下情况，溶解曲线看起来也很纠结，不知道是什么原因？求助~[eimg]2014/0730/w131h1221753_1406703789_743.png|bcs...

1，看书上写qPCR中两步法一般适用于片段较短的，100-200bp，我设计的引物跑出来的片段有400bp的，还能用两步法吗？2，另外问，上机的Tm提高0.3℃影响会很大不？

[img]...为QPCR设计的引物，除C2F/C2R,H2F/H2R外，其它为什么都跑不出来或杂带，想请大侠一一分析下，哪些是因为Tm值？哪些是因为3‘端碱基的问题？哪些是因为GC%

最近做荧光定量，问题重重，先是跑了个内参试试，做个标曲，结果出来了，扩增效率很高，达到200%，不过溶解曲线却是单一峰；还有就是ntc也有值，搞不明白，跑了个胶发现有条带应该是引物二...

不知道qPCR的引物拿来做普通RT-PCR是不是不合适？同时在检索过程中发现NCBI...昨天P出来的东西放在4度，早上去实验室又做了一个2%的胶，只把昨天P出条带的那对引物扩增的产物拿出来跑了一下。...