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Hxiaopl

新虫 (初入文坛)

[交流] 质粒提取电泳条带不正确已有5人参与

想请教一下,提完质粒跑电泳,质粒大小是5000bp,但是条带只有第一次电泳正确了,后面用这管提取的质粒再次电泳一直在8000bp,没有目的条带,重新摇菌提取也是在8000bp,这是怎么回事呀

用的天根质粒小提试剂盒

双酶切再次电泳也是8000多bp,然后接着拿去做酶切连接转化,验证的质粒构建是否成功的时候,再次双酶切,还是只有8000多的条带,没有插入的片段(700bp),但用质粒pcr,又能p出插入片段的条带

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小幽不读书

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提取过程中质粒解旋或者断裂的话迁移速率会下降,看上去就像质粒变大了。然后切下来的片段较小的话电泳时候可能会看不到,可以考虑用EB,虽然有毒,但效果是真的好
幽幽幽
9楼2022-07-30 15:57:17
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围脖

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
感觉你表述不清,个人感觉,非专业

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2楼2022-07-19 08:06:28
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Hxiaopl

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 围脖 at 2022-07-19 08:06:28
感觉你表述不清,个人感觉,非专业

刚学分子实验,在自己摸索

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3楼2022-07-19 10:05:32
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Hxiaopl

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Hxiaopl at 2022-07-19 10:05:32
刚学分子实验,在自己摸索
...

就是提取完质粒去电泳,条带第一次正确,第二次就不对了,看了网上的分析,就酶切后再去跑电泳,还是条带不正确,用的都是用一次提取的质粒。就是不明白为什么条带会突然不正确,不敢往下做

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4楼2022-07-19 10:07:37
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