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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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WentworthM

铁虫 (初入文坛)


[交流] 载体构建求帮助!

本人从上半年开始一直在构一个重组载体,是一个合成的目的片段(135bp)双酶切连接到pCAMBIA3301这个载体上,选用的酶切位点是HindⅢ和NcoI,酶切连接转化到大肠杆菌之后,挑菌做菌pcr鉴定,用我目的片段引物跑的都是有条带的,但是我根据载体序列在HindⅢ和NcoI上下游各加了200bp,加上我的目的片段应有500+bp的长度的带,这个一直都跑不出来,理论上连接成功是能跑出来的,实验重复了七八次了,包括提高引物浓度,换引物,加保护碱基等,都没啥效果,现求大佬帮忙指导!(图片发不上来
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