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WentworthM

新虫 (初入文坛)


[交流] 载体构建求帮助!

本人从上半年开始一直在构一个重组载体,是一个合成的目的片段(135bp)双酶切连接到pCAMBIA3301这个载体上,选用的酶切位点是HindⅢ和NcoI,酶切连接转化到大肠杆菌之后,挑菌做菌pcr鉴定,用我目的片段引物跑的都是有条带的,但是我根据载体序列在HindⅢ和NcoI上下游各加了200bp,加上我的目的片段应有500+bp的长度的带,这个一直都跑不出来,理论上连接成功是能跑出来的,实验重复了七八次了,包括提高引物浓度,换引物,加保护碱基等,都没啥效果,现求大佬帮忙指导!(图片发不上来
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asd_lxz

铁虫 (正式写手)



WentworthM(金币+2): 谢谢参与
把500bp分几段测,中间有overlap

发自小木虫IOS客户端
4楼2021-10-16 21:05:42
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forhighbio

捐助贵宾 (正式写手)



WentworthM(金币+2): 谢谢参与
这也做不好吗

发自小木虫Android客户端
5楼2021-10-17 11:39:43
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kervinzhao

铁杆木虫 (职业作家)



WentworthM(金币+2): 谢谢参与
asdas
6楼2021-10-17 16:23:46
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问楼主,你做这个PCR有什么意义吗?
测序不行吗?
干嘛要这么折腾呢?
时间不值钱?
7楼2021-10-18 12:38:49
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简单回复
tzynew2楼
2021-10-16 20:55   回复  
WentworthM(金币+2): 谢谢参与
o 发自小木虫Android客户端
nono20093楼
2021-10-16 20:57   回复  
WentworthM(金币+2): 谢谢参与
`
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