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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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WentworthM

铁虫 (初入文坛)

[交流] 载体构建求帮助！

本人从上半年开始一直在构一个重组载体，是一个合成的目的片段(135bp)双酶切连接到pCAMBIA3301这个载体上，选用的酶切位点是HindⅢ和NcoI，酶切连接转化到大肠杆菌之后，挑菌做菌pcr鉴定,用我目的片段引物跑的都是有条带的，但是我根据载体序列在HindⅢ和NcoI上下游各加了200bp，加上我的目的片段应有500+bp的长度的带，这个一直都跑不出来，理论上连接成功是能跑出来的，实验重复了七八次了，包括提高引物浓度，换引物，加保护碱基等，都没啥效果，现求大佬帮忙指导！（图片发不上来）
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1楼2021-10-16 20:44:16
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asd_lxz

铁虫 (正式写手)
★
WentworthM(金币+2): 谢谢参与
把500bp分几段测，中间有overlap

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4楼2021-10-16 21:05:42
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
★
WentworthM(金币+2): 谢谢参与
这也做不好吗

发自小木虫Android客户端
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5楼2021-10-17 11:39:43
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kervinzhao

铁杆木虫 (职业作家)
★
WentworthM(金币+2): 谢谢参与
asdas
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6楼2021-10-17 16:23:46
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主，你做这个PCR有什么意义吗？
测序不行吗？
干嘛要这么折腾呢？
时间不值钱？
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7楼2021-10-18 12:38:49
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Loneeeee

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
合成的基因为什么不直接让公司加到载体上。擎科或者生工合成基因然后直接构建到载体上一共才不到300元

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8楼2021-12-27 14:06:30
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tzynew2楼
2021-10-16 20:55   回复  
WentworthM(金币+2): 谢谢参与
o 发自小木虫Android客户端
nono20093楼
2021-10-16 20:57   回复  
WentworthM(金币+2): 谢谢参与
`
范慕博9楼
2022-11-13 15:42   回复  
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