| 查看: 1656 | 回复: 1 | ||
[求助]
pET-30a原核蛋白表达疑问 已有1人参与
|
|
新手刚做原核蛋白表达，有许多不明白的地方请教。 1.pET-30a上本身带有两个组氨酸标签，我以后纯化蛋白时要用到组氨酸标签。但是不知道是两个组氨酸标签都留着好还是只留一个好，要是只留一个留哪个呢？还是说根据蛋白大小决定？看到很多前辈说到纯化时挂不上柱子，是不是就和这里组氨酸标签的选择有关系呢？ 2.看到一些帖子说到以后还要去除组氨酸标签，为什么呢？ 2.是否需要自己添加终止子？ 3.蛋白的大小控制在多大合适呢？最终是打算让蛋白入核的。 |
回复此楼» 猜你喜欢
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有163人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
霜落雪: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-02-25 13:05:54
感谢参与，应助指数 +1
霜落雪: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-02-25 13:05:54
|
个人理解如下： 1.pET-30a上本身带有两个组氨酸标签，我以后纯化蛋白时要用到组氨酸标签。但是不知道是两个组氨酸标签都留着好还是只留一个好，要是只留一个留哪个呢？还是说根据蛋白大小决定？看到很多前辈说到纯化时挂不上柱子，是不是就和这里组氨酸标签的选择有关系呢？ 看蛋白构象，哪端暴露在外面就留哪端的标签。如果要留C端的标签（记得是从N端开始表达），那么自己基因的终止子就要去掉，要不标签就不表达了。 2.看到一些帖子说到以后还要去除组氨酸标签，为什么呢？ 这个主要看表达后做什么用吧，有的带有酶切位点还能切掉，没有的话，不好去除吧。 2.是否需要自己添加终止子？ 把目的基因插入到多克隆位点，用自己基因的终止子，或把自己的终止子去掉用载体上的。 3.蛋白的大小控制在多大合适呢？最终是打算让蛋白入核的。 这个不清楚，你表达的蛋白还能控制吗，还是可以只表达某个结构域。 建议所有问题都考虑清楚，理解原理后再开始试验，要不可能会返工的。 |
2楼2016-02-25 12:16:20
10