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shmimy

铜虫 (小有名气)

[交流] RNA转录不成功的原因

我提的RNA电泳后的28s和18s有明显的2:1的亮度比例
但是反转以后的cDNA跑电泳后还是有类似RNA的两条带出现
但是正常情况下cDNA电泳图应该是分布在2500bp-1000bp之间的均匀的弥散条带,我是用promega的AMV试剂盒来反转的
试剂盒没有问题
我的初步判断是因为RNA的问题
因为别人用我的试剂盒做出来了
所以想问一下各位
RNA如何来影响反转效率,并且怎么来克服RNA的这些问题?
谢谢
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shmimy

铜虫 (小有名气)

因为要克隆长片段基因
所以要求反转录质量要好
3楼2008-10-10 22:23:33
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yangym1123

木虫 (小有名气)


shmimy(金币+1,VIP+0):谢谢
我们没有用电泳的方法检测过反转录的cDNA是否成功,但是我们用管家基因B-actin扩增如果得到大小合适亮度均一的条带,就认为反转录是成功的,我们实验室一直这样来检测的,并且普通的反转录对RNA的质量要求并不高!
2楼2008-10-10 22:00:32
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lipishun

金虫 (小有名气)

能PCR出来就是王道,哈哈!
4楼2008-10-11 09:16:01
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speculiar

银虫 (小有名气)

同意楼上的,PCR有需要的东西出来就行了。何必那么麻烦?
5楼2008-10-11 21:30:34
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