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RNA转录不成功的原因
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我提的RNA电泳后的28s和18s有明显的2：1的亮度比例 但是反转以后的cDNA跑电泳后还是有类似RNA的两条带出现 但是正常情况下cDNA电泳图应该是分布在2500bp-1000bp之间的均匀的弥散条带，我是用promega的AMV试剂盒来反转的 试剂盒没有问题 我的初步判断是因为RNA的问题 因为别人用我的试剂盒做出来了 所以想问一下各位 RNA如何来影响反转效率，并且怎么来克服RNA的这些问题？ 谢谢 |
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哈哈 能出来当然是王道 出不来就得找原因了 比如别人的基因拷贝数本身就比较高，别人的基因mRNA短小很容易逆转录和扩增，很不容易降解，比如别人的样本处理比你好，比如别人做实验的时候有些小细节你没注意到 第一，必须做阳性对照管家基因，短小好扩增的都可以B-actin是常用，如果你这个都没出来就别做了 第二，处理样本最重要，你必须确保是新鲜组织没有降解 别偷懒，一取来立刻就提取，提取好的RNA也需要立刻进行反转录 如果实在不允许，可以把样本初步粉碎后泡在TRIZOL里面放在-70度冰箱保存 个人感觉样本降解是造成逆转录失败最大的原因 第三，还是要注意一下提取RNA的环境了，虽然没有那么严格，但那是对于熟手而言的，你如果目前不成功，试一下相关试剂、移液器尽量换新，提取地点还是尽量选一个洁净的环境好些 |
6楼2008-10-13 09:44:20
