| 查看: 738 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
RNA转录不成功的原因
|
|||
|
我提的RNA电泳后的28s和18s有明显的2：1的亮度比例 但是反转以后的cDNA跑电泳后还是有类似RNA的两条带出现 但是正常情况下cDNA电泳图应该是分布在2500bp-1000bp之间的均匀的弥散条带，我是用promega的AMV试剂盒来反转的 试剂盒没有问题 我的初步判断是因为RNA的问题 因为别人用我的试剂盒做出来了 所以想问一下各位 RNA如何来影响反转效率，并且怎么来克服RNA的这些问题？ 谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
材料与化工（0856）304求B区调剂
已经有6人回复
-
348求调剂
已经有5人回复
-
308求调剂
已经有5人回复
-
299求调剂
已经有6人回复
-
0856，材料与化工321分求调剂
已经有3人回复
-
311求调剂
已经有7人回复
-
085600，材料与化工321分，求调剂
已经有8人回复
-
一志愿华东理工大学081700，初试分数271
已经有7人回复
-
085601 材料工程 313分 求调剂
已经有5人回复
-
22408 359分调剂
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
yangym1123
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1963.2
- 帖子: 230
- 在线: 30.2小时
- 虫号: 397777
- 注册: 2007-06-10
- 专业: 动物形态学及胚胎学
2楼2008-10-10 22:00:32
3楼2008-10-10 22:23:33
lipishun
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 704.1
- 帖子: 107
- 在线: 17.2小时
- 虫号: 485503
- 注册: 2007-12-27
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
4楼2008-10-11 09:16:01
speculiar
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 404.4
- 帖子: 203
- 在线: 147.9小时
- 虫号: 577721
- 注册: 2008-06-27
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
5楼2008-10-11 21:30:34
★ ★ ★ ★
shmimy(金币+2,VIP+0):挺好的,谢谢
shmimy(金币+2,VIP+0):谢谢
shmimy(金币+2,VIP+0):挺好的,谢谢
shmimy(金币+2,VIP+0):谢谢
|
哈哈 能出来当然是王道 出不来就得找原因了 比如别人的基因拷贝数本身就比较高，别人的基因mRNA短小很容易逆转录和扩增，很不容易降解，比如别人的样本处理比你好，比如别人做实验的时候有些小细节你没注意到 第一，必须做阳性对照管家基因，短小好扩增的都可以B-actin是常用，如果你这个都没出来就别做了 第二，处理样本最重要，你必须确保是新鲜组织没有降解 别偷懒，一取来立刻就提取，提取好的RNA也需要立刻进行反转录 如果实在不允许，可以把样本初步粉碎后泡在TRIZOL里面放在-70度冰箱保存 个人感觉样本降解是造成逆转录失败最大的原因 第三，还是要注意一下提取RNA的环境了，虽然没有那么严格，但那是对于熟手而言的，你如果目前不成功，试一下相关试剂、移液器尽量换新，提取地点还是尽量选一个洁净的环境好些 |
6楼2008-10-13 09:44:20
