| 查看: 2429 | 回复: 2 | ||
真果粒新虫 (初入文坛)
|
[求助]
质粒长片段pcr及质粒的重新构建 已有2人参与
|
|
准备在一个购买的一个质粒（12kb）加一个基因，但由于没有合适的酶切位点，所以准备先将原质粒进行全长pcr，并在引物上添加酶切位点，最后和目的基因连接构建新的质粒。但在p质粒全长的时候遇到如下图（左边两泳道）的问题。即：目的条带较暗，而点样孔里面较亮。LArtaq和primestar GXL两种酶都用过，也差不多都这样。反应条件LArtaq：95℃：5min 94℃:45s (55-68℃)： 45s 72℃：11min 72℃：10min ，primestar GXL是根据其说明书来的：（三步法）95℃：5min 98℃:10s (65℃和60℃均用过)： 15s 72℃（说明书上用的是68℃也用过）：11min(说明书上超过10kb的延伸时间为10min，也试过) ;（两步法）95℃：5min 98℃:10s 68℃：10min 68℃：10min。引物包装上给出的温度是70和72摄氏度（引物上加了酶切位点）。 各位大神，出现如图的情况是啥原因？另外，进行用上面的方法重构质粒的方法可行吗？  小木虫.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有105人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
kangaroo0513
新虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 154 (高中生)
- 金币: 2277.4
- 散金: 100
- 红花: 29
- 帖子: 464
- 在线: 119.4小时
- 虫号: 2621902
- 注册: 2013-08-28
- 专业: 细胞物质运输
2楼2016-02-22 15:09:13
3楼2016-02-22 16:24:16