版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

2

jackyoung

新虫 (正式写手)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 3507.7
散金: 60
红花: 23
帖子: 670
在线: 91.7小时
虫号: 799178
注册: 2009-06-26
性别: GG
专业: 园艺学与植物营养学

二楼的平端克隆很靠谱，如果非要T-载体，可以直接拿回收产物加Taq和dNTPs 72度20分钟，不用回收直接连接。我们一般都是在PS酶括增体系的最后加入Taq，在72度孵育10分钟，然后切胶回收连接。

发自小木虫Android客户端

赞一下(2人)

CestLaVie

11楼2016-02-22 23:46:00

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

jackyoung

新虫 (正式写手)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 3507.7
散金: 60
红花: 23
帖子: 670
在线: 91.7小时
虫号: 799178
注册: 2009-06-26
性别: GG
专业: 园艺学与植物营养学

引用回帖:

5楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-02-22 00:42:55
1、你问人的3种答案，只有1比较靠谱，其他两种都别试，2和3那是增加突变概率。我试过PCR产物切胶回收后，再用普通的taq在buf和dNTP里72度30min，然后再回收，再连普通的T。这个办法看人品的，人品好的时候杠杠滴，人 ...

我们用2-3屡试不爽，难道人品太好了，我们不加循环哪里增加的突变？

发自小木虫Android客户端

CestLaVie

12楼2016-02-22 23:47:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

sunlk

铜虫 (正式写手)

应助: 33 (小学生)
金币: 91.1
散金: 401
红花: 3
帖子: 313
在线: 335.3小时
虫号: 844312
注册: 2009-09-09
性别: GG
专业: 疫苗学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

如果是做克隆的话，没必要操作这一步啊，直接用限制性内切酶切直接连想要的载体。

赞一下(1人)

很给力

13楼2016-02-23 08:22:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

水杯小一

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 1135.7
红花: 2
帖子: 107
在线: 101.9小时
虫号: 3074252
注册: 2014-03-20
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

直接在反应完的原体系里加2ul的rTaq，72℃反应5-10min，妥妥的

赞一下(1人)

14楼2016-02-24 16:16:38

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

蕨类森林

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1414.7
红花: 1
帖子: 69
在线: 21.2小时
虫号: 2337627
注册: 2013-03-11
专业: 植物遗传学

引用回帖:

14楼: Originally posted by 水杯小一 at 2016-02-24 16:16:38
直接在反应完的原体系里加2ul的rTaq，72℃反应5-10min，妥妥的

嗯，我是切完胶了才发现没有加尾，所以用切胶产物加尾再连接的，测序结果回来后发现有接近一半明明菌落PCR条带大小差不多是对的，但序列却比对不上，这是什么原因呢？

15楼2016-03-04 19:03:41

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

蕨类森林

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1414.7
红花: 1
帖子: 69
在线: 21.2小时
虫号: 2337627
注册: 2013-03-11
专业: 植物遗传学

引用回帖:

9楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-02-22 22:58:29
solution1的话，4度过夜。我之前也在用。我从来不用蓝白斑，所以不知道蓝白斑的事情，我都是菌液PCR或者抽质粒酶切鉴定的。...

嗯，我也是蓝白斑之后挑菌落进行PCR验证然后送测序，但发现很多明明条带大小是对的，但测序结果却不对，这可能是什么原因呢？

16楼2016-03-04 19:07:08

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zjsuiyuan

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 936.4
散金: 20
帖子: 44
在线: 10.5小时
虫号: 3103975
注册: 2014-03-31
专业: 生物物理、生物化学与分子

Pcr跑完后，直接加入tag酶延伸10分钟左右就行！

发自小木虫Android客户端

17楼2016-03-04 20:32:08

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)

应助: 85 (初中生)
金币: 1294.2
散金: 30
红花: 7
帖子: 1933
在线: 149.4小时
虫号: 0
注册: 2013-10-14
专业: 兽医免疫学

本帖仅楼主可见

18楼2016-03-04 21:35:58

已阅申请MolEPI 回复此楼编辑查看我的主页

水杯小一

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 1135.7
红花: 2
帖子: 107
在线: 101.9小时
虫号: 3074252
注册: 2014-03-20
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

15楼: Originally posted by 蕨类森林 at 2016-03-04 19:03:41
嗯，我是切完胶了才发现没有加尾，所以用切胶产物加尾再连接的，测序结果回来后发现有接近一半明明菌落PCR条带大小差不多是对的，但序列却比对不上，这是什么原因呢？...

测序结果去载体后反向互补得到的序列有没有比对

赞一下(1人)

19楼2016-03-05 09:18:49

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

蕨类森林

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1414.7
红花: 1
帖子: 69
在线: 21.2小时
虫号: 2337627
注册: 2013-03-11
专业: 植物遗传学

引用回帖:

19楼: Originally posted by 水杯小一 at 2016-03-05 09:18:49
测序结果去载体后反向互补得到的序列有没有比对...

嗯我有进行反向互补，但没有去载体，我看到你这么说就去搜了下怎么去载体，比较易懂的好像就在NCBI上进行，但我们这儿网速慢，又感觉比得上的就比得上，没去也行，但比不上的颠来倒去的都比不上呢~~所以就没去，如果只是没去载体这样影响大吗？

20楼2016-03-08 16:05:05

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主蕨类森林的主题更新

2