| 查看: 1015 | 回复: 4 | ||
王希lily新虫 (初入文坛)
|
[求助]
谁做过IMPACT-TWIN 蛋白纯化呀？紧急求助 已有2人参与
|
| 本人做原核表达已有一年多了，用的表达载体是PTWIN1，好不容易表达了且表达在上清，但是在纯化上又卡住了。纯化是买的NEB公司的几丁质珠，按照说明书进行的操作：将5ml chitin beads倒入2.5×10 cm柱中，10个柱床体积的缓冲液Buffer B1（20mM Tris-Hcl 8.5,500mM Nacl,1mM EDTA）进行柱平衡；将澄清的细胞粗提物缓慢加入Chitin柱，流速约为0.5-1.0 ml/min；用100 mL的缓冲液Buffer B1彻底洗柱；用3倍柱床体积Buffer B2（20mM Tris-Hcl 6.5,500mM Nacl,1mM EDTA）洗柱，4℃放置48h；48h后用3倍柱床体积的Buffer B1，将目的蛋白洗脱收集，但是收集时仪器上没有峰值。上样后的穿出液在SDS-PAGE上证明已经挂上了柱子，但是最后的洗脱液在SDS-PAGE上什么也没有。请问哪位大侠做此类纯化或者用过几丁质株呢？给点意见或者建议吧，本人已做了2个月了，一直纯化不出来，紧急求助各位大神。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有278人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 2012 SCI impact factor 生物材料类 评点
已经有9人回复
- 英文论文写作、投稿过程中的注意事项
已经有7人回复
- 【公告】微米纳米版专家介绍及顾问室链接[20120909更新]
已经有11人回复
- 英文SCI论文写作、投稿过程中的注意事项
已经有14人回复
- SCI的陷阱
已经有40人回复
- 英文论文写作、投稿过程中的注意事项
已经有5人回复
- 【分享】硕士写文章的指导手册（博士可参考）【已搜无重复】
已经有23人回复
- 英文论文写作、投稿过程中的注意事项
已经有96人回复
- 英文论文写作、投稿过程中的注意事项（转）
已经有8人回复
- 英文论文写作、投稿过程中的注意事项（搜，无重）
已经有17人回复
2楼2016-02-19 15:41:20
王希lily
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 582.9
- 散金: 3
- 帖子: 36
- 在线: 4.9小时
- 虫号: 3834615
- 注册: 2015-04-26
- 性别: MM
- 专业: 基础兽医学
3楼2016-02-19 15:54:48
protein780
铁虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 184.4
- 散金: 2
- 红花: 2
- 帖子: 135
- 在线: 61.1小时
- 虫号: 2024196
- 注册: 2012-09-23
- 专业: 蛋白质组学
4楼2016-05-04 21:35:48
5楼2016-06-04 14:04:46
