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1983656190

木虫 (小有名气)

[求助] 大神们,请教一个问题,大肠杆菌培养,在液体培养基中培养基混浊... 已有1人参与

大神们,请教一个问题,大肠杆菌培养,在液体培养基中培养基混浊说明菌已经复苏了,然后接种到固体培养基的时候,为什么固体培养基上长不出来菌了呢?之前两次都能长的出来,而且效果不错,后两次要么是空白组只有一两个菌,要么全都没了,空白实验组是没有加杀菌药物(我说下我觉得有点问题的步骤看看哪里出错了,1.固体培养基我是杀完菌后直接弄到培养皿上面,然后就放在桌子上等待接种,由于做好多组实验时间不同,时间太长的话会不会由于培养基太冷了菌长不出来呢?因为这几天天气冷了,之前天气暖和的时候能长出来。当然最后都是放到培养箱中进行培养的2.用涂布法的时候我烧了下涂布器,然后放在固体培养基上先冷却再涂布,应该不会把细菌杀死吧~) @天使托

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棋子一小枚

新虫 (初入文坛)

一般不会因为接种时间太长培养基温度下降有影响,最后培养都放到恒温箱就好啦,是不是恒温箱温度不够呢?37°C,另外培养的时间也要够哇。接种环确实酒精灯下灼烧灭菌要冷却一会儿,不然会烧死(我确实烧死过)。。,固体培养基高压灭菌后倒平板要冷却成固体才可以接种,接种时也不要划破,另外挑取菌种是不是不完全呢?

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2楼2016-02-20 11:12:21
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普通回帖

1983656190

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 棋子一小枚 at 2016-02-20 11:12:21
一般不会因为接种时间太长培养基温度下降有影响,最后培养都放到恒温箱就好啦,是不是恒温箱温度不够呢?37°C,另外培养的时间也要够哇。接种环确实酒精灯下灼烧灭菌要冷却一会儿,不然会烧死(我确实烧死过)。。 ...

温度都有在37度的,时间的话我是经过24小时候进行数菌落,应该时间够了吧?接种的时候也没有划破的,前两次养得时候还好,菌落都挺多的,后来第三次,第四次,要么只有一两个菌落,要么没有,平行试验做了三组,都是这样子的,就想着液体培养基里面养得好好的,到固体培养基里为什么不行了呢,我是挑去菌落先到液体培养基里面,液体培养基里面的菌是活的,然后再次接种到固体培养基里面,菌落都长不出来
3楼2016-02-20 16:54:00
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棋子一小枚

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 1983656190 at 2016-02-20 16:54:00
温度都有在37度的,时间的话我是经过24小时候进行数菌落,应该时间够了吧?接种的时候也没有划破的,前两次养得时候还好,菌落都挺多的,后来第三次,第四次,要么只有一两个菌落,要么没有,平行试验做了三组,都 ...

会不会因为培养基的问题呢,有没有加什么抗生素之类的,抗生素可能对菌落生长不利,或者单独放在室内培养一段时间,看看能不能长出杂菌,能的话说明培养基没问题,接种的菌落密度够不够呀,ph,盐度有没有问题呀

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4楼2016-02-20 17:33:54
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1983656190

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 棋子一小枚 at 2016-02-20 17:33:54
会不会因为培养基的问题呢,有没有加什么抗生素之类的,抗生素可能对菌落生长不利,或者单独放在室内培养一段时间,看看能不能长出杂菌,能的话说明培养基没问题,接种的菌落密度够不够呀,ph,盐度有没有问题呀
...

没加抗生素的,调了ph,杂菌长不出来吧,高温杀过菌了。是按照培养基配比配的,主要是刚开始做的两次都成功了,后来两次菌落一个都没长出来。。

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5楼2016-02-20 17:41:25
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yanyijiang

金虫 (小有名气)

普通的山东人

也可能你复苏的菌根本不是大肠杆菌,已经前期染菌了,所以这个选择性的培养基不能让它生长

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酸爽无比
6楼2016-02-21 21:27:38
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TT-Mac

新虫 (正式写手)

液体培养的放了多久才拿来涂布呢?
阳光宅男
7楼2016-02-22 08:16:26
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1983656190

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by TT-Mac at 2016-02-22 08:16:26
液体培养的放了多久才拿来涂布呢?

第一天晚上过夜培养好,第二天接种成为第三代工作菌,加入药剂当天就涂布了

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8楼2016-02-22 10:33:44
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1983656190

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yanyijiang at 2016-02-21 21:27:38
也可能你复苏的菌根本不是大肠杆菌,已经前期染菌了,所以这个选择性的培养基不能让它生长

这个不太可能吧,菌种是放在冰箱保存的,也是表面光滑的白色圆点,没有其他杂菌生成啊

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9楼2016-02-22 10:36:09
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淹死的狗狗呢

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

没有进行稀释涂布吗?直接涂的?可能是涂布器温度太高,烧死大肠杆菌了
原来每个人的当口,四顾无人,不得不面对自己,自己的孤独,还有自己真正的梦想。
10楼2016-02-22 11:02:09
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