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木虫 (小有名气)

[求助] 大神们,请教一个问题,大肠杆菌培养,在液体培养基中培养基混浊... 已有1人参与

大神们,请教一个问题,大肠杆菌培养,在液体培养基中培养基混浊说明菌已经复苏了,然后接种到固体培养基的时候,为什么固体培养基上长不出来菌了呢?之前两次都能长的出来,而且效果不错,后两次要么是空白组只有一两个菌,要么全都没了,空白实验组是没有加杀菌药物(我说下我觉得有点问题的步骤看看哪里出错了,1.固体培养基我是杀完菌后直接弄到培养皿上面,然后就放在桌子上等待接种,由于做好多组实验时间不同,时间太长的话会不会由于培养基太冷了菌长不出来呢?因为这几天天气冷了,之前天气暖和的时候能长出来。当然最后都是放到培养箱中进行培养的2.用涂布法的时候我烧了下涂布器,然后放在固体培养基上先冷却再涂布,应该不会把细菌杀死吧~) @天使托

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木虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by 棋子一小枚 at 2016-02-20 11:12:21
一般不会因为接种时间太长培养基温度下降有影响,最后培养都放到恒温箱就好啦,是不是恒温箱温度不够呢?37°C,另外培养的时间也要够哇。接种环确实酒精灯下灼烧灭菌要冷却一会儿,不然会烧死(我确实烧死过)。。 ...

温度都有在37度的,时间的话我是经过24小时候进行数菌落,应该时间够了吧?接种的时候也没有划破的,前两次养得时候还好,菌落都挺多的,后来第三次,第四次,要么只有一两个菌落,要么没有,平行试验做了三组,都是这样子的,就想着液体培养基里面养得好好的,到固体培养基里为什么不行了呢,我是挑去菌落先到液体培养基里面,液体培养基里面的菌是活的,然后再次接种到固体培养基里面,菌落都长不出来
3楼2016-02-20 16:54:00
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4楼: Originally posted by 棋子一小枚 at 2016-02-20 17:33:54
会不会因为培养基的问题呢,有没有加什么抗生素之类的,抗生素可能对菌落生长不利,或者单独放在室内培养一段时间,看看能不能长出杂菌,能的话说明培养基没问题,接种的菌落密度够不够呀,ph,盐度有没有问题呀
...

没加抗生素的,调了ph,杂菌长不出来吧,高温杀过菌了。是按照培养基配比配的,主要是刚开始做的两次都成功了,后来两次菌落一个都没长出来。。

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5楼2016-02-20 17:41:25
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7楼: Originally posted by TT-Mac at 2016-02-22 08:16:26
液体培养的放了多久才拿来涂布呢?

第一天晚上过夜培养好,第二天接种成为第三代工作菌,加入药剂当天就涂布了

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8楼2016-02-22 10:33:44
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6楼: Originally posted by yanyijiang at 2016-02-21 21:27:38
也可能你复苏的菌根本不是大肠杆菌,已经前期染菌了,所以这个选择性的培养基不能让它生长

这个不太可能吧,菌种是放在冰箱保存的,也是表面光滑的白色圆点,没有其他杂菌生成啊

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9楼2016-02-22 10:36:09
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10楼: Originally posted by 淹死的狗狗呢 at 2016-02-22 11:02:09
没有进行稀释涂布吗?直接涂的?可能是涂布器温度太高,烧死大肠杆菌了

有进行稀释涂布的,1000,10000,100000,这三个倍数,昨天又做了一遍,发现空白组能长出细菌,不过没有之前养得效果比较好的那么多。然后加入药剂的平板有一个有长出来细菌,其他都是空白的平板,涂布都有先在固体培养基上触碰冷却再涂,应该不会烧死吧
13楼2016-02-24 10:05:21
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12楼: Originally posted by 冰封雪 at 2016-02-22 22:47:11
我觉得楼上这个办法可以试一试,看能不能排除是固体培养基的问题,比如把培养基打开放在外面然后37度培养看会不会长菌;或者换一种菌接一下试试。因为万一配培养基的时候什么东西加错了或者变质了也是有可能的。先 ...

液体培养基培养好好的,到固体效果不好,买了琼脂,到货了试试效果看看能不能改良~多谢了
14楼2016-02-24 10:08:06
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11楼: Originally posted by skull123 at 2016-02-22 11:55:00
如果是抗性株的话你在复苏的时候就得注意用抗性平板复苏,不然在扩大培养的过程中如果培养基没有抗性就会导致后来生长所用的菌抗性丢失...

菌是放在冰箱保存的,之前两次复苏都挺好的,后面再做两次的时候发现效果不好了,抗性株这个咋说呢?是说之前用了抗生素培养然后存活下来的么?刚开始画线也是用LB肉汤培养基来培养的,没出现异常啊,然后就放冰箱保存,等待做实验的时候拿出来复苏做实验的。
15楼2016-02-24 10:13:32
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